基于冷等离子体技术的蓝莓杀菌和保鲜研究(2)
本实验研究是利用介质阻挡的放电等离子体设备，对采摘后的蓝莓鲜果进行杀菌处理，探讨冷等离子体杀菌对蓝莓表面的微生物数量、蓝莓品质及生理生化指标的影响，为蓝莓贮藏保鲜提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
供试蓝莓品种为“灿烂” (Vaccinium ashei cv. Brilliant)，果实在商业成熟时采收，并在2 h内运送至实验室。挑选个头大小、颜色上基本一致，无机械损伤和腐烂的蓝莓果实以供试验用。
1.2 试验仪器与设备
介质阻挡放电型 (DBD)冷等离子体设备，美国Phenix Technologies；TA.new plus质构仪，美国ISENSO；PAL-1型便携式色差计，日本ATAGO；UV1800型紫外分光光度计，日本Shimaduz；恒温恒湿箱CTHI-250B，上海施都凯设备公司。
1.3 试验方法
图1为本试验所用介质阻挡放电等离子体发生设备的示意图。在两个放电电极之间的密闭包装中产生等离子体，主要起杀菌或抑菌作用的是干燥空气中的臭氧和UV光。通过单因素试验确定了冷等离子体处理条件，筛选出杀菌效果好且对蓝莓果实特征无影响的处理时间和电压，工作电压为45kV，处理时间为50s。
图1 冷等离子体处理样品蓝莓的发生装置示意图
将果实分装于塑料托盘中，用塑料薄膜密封，每盒装120 g蓝莓果实，利用DBD低温等离子体设备在工作电压45kV下处理50s。处理后立即检测蓝莓表面微生物数量，并将样品置于20 ℃、85 % RH恒温恒湿箱中贮藏，每2 d取样检测各项指标。每个指标重复测定3次。
1.4 测定项目与方法
1.4.1表面微生物菌落总数
采用涂布平板计数法。每组取8个蓝莓果实 (≈14 g) 于100 ml锥形瓶中，加入25 ml无菌生理盐水，用涡旋仪震荡1 min制成样品液。设置3个稀释度，分别吸取0.1 ml 样品稀释液于平板计数琼脂 (PCA) 培养基和马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) 培养基上，涂布均匀。PCA平板在37 ℃培养24~48 h，PDA平板在28 ℃培养 5-7 d，分别用以计数细菌菌落总数和真菌菌落总数。杀菌处理后立即进行微生物指标检测，之后每48 h检测一次，每次实验重复三次。
1.4.2 蓝莓品质指标
腐烂率：采用计数法测定。果实表面有可见菌丝体生长即为腐烂，腐烂程度以百分比表示。
果实硬度：采用TA. new plus质构仪测定。选用柱形探头TA/2（直径为5 mm），测试速度为1 mm/s，穿刺深度为5 mm，测定穿刺过程中，数据显示质构仪测定到的最大力即为蓝莓硬度。每一组测10个蓝莓果实，每个果实测2次。
可溶性固形物含量(SSC)：每组取10个蓝莓果实，去皮破碎之后，用3层纱布进行过滤，采用PAL-1型数显折光仪重复3次测定Brix (%) 值。
可滴定酸含量 (TA)：采用电位滴定法测定。用0.1 mol/L NaOH 滴定至pH 8.1，以柠檬酸百分数表示。
VC含量：采取钼酸铵比色法来对蓝莓样品进行测定。称取2.0 g样品果肉，加5 ml草酸-EDTA，冰浴研磨，4℃ 下6000 r/min离心15 min，取2 ml上清液，依次加入3 ml草酸-EDTA、0.5 ml偏磷酸-乙酸、1.0 ml硫酸溶液、2.0 mL钼酸铵溶液，用蒸馏水定容至20 ml。80℃水浴1h，在760 nm波长下测定吸光值。
总酚含量：采用乙醇酸比色法测定。取1.0 g样品，加少许1%盐酸-乙醇溶液冰浴研磨，定容至50 ml。在40 ℃下超声提取1 h后进行10000 r/min离心5 min，取滤液测定其在240 nm处的吸光值。以不同浓度的没食子酸 (2.0~20.0 mg/L) 来绘制标准曲线，样品总酚含量以 (mg/g没食子酸) 来表示。
花青素含量：采用pH示差法。根据花青素的发色基团在pH1.0和pH4.5间结构的不同，以吸光值之差表示相对花青素含量。利用紫外分光光度计测定pH1.0和pH4.5的样品缓冲液在520 nm和700 nm处的吸光值。根据公式和矢车菊素-3-葡萄糖苷 (CG) 的摩尔吸光系数29600计算，结果以 (mg/100g矢车菊苏葡萄糖苷) 来表示。
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