从鸡蛋蛋黄中提取分离唾液酸糖肽研究(4)
[4]在之前的研究中，最为有效的分离制备唾液酸糖肽的方法是由日本人Seko及其团队在1997年报道的。Seko等人从新鲜鸡蛋卵黄中分离得到SGP，其方法主要包括以下步骤：（1）用苯酚处理新鲜鸡蛋卵黄；（2）G-50 gel filtration分离；（3）再次用G-50 gel filtration分离；（4）G-25 gel filtration 脱盐；（5）DEAE-Toyopearl 650M阴离子交换柱分离；（6）CM-Sephadex C-25阳离子交换柱分离；（7）G-25 gel filtration 脱盐；但是这个方法有许多不足之处：它需要7个主要的分离步骤，步骤繁多，成本高，周期长，因为糖蛋白糖链的复杂性，使得糖链的结构与功能的研究一直是生物和医药领域研究的难点，带有均一糖链的蛋白，对于其研究是必不可少的。而唾液酸糖肽是一种人源化的糖肽，可以作为糖蛋白人源化改造的糖苷供体。因此，开发一个步骤简，成本低，周期短的分离制备唾液酸糖肽的方法对于糖蛋白结构功能和生物医药领域都具有十分重要的意义。
2.3 唾液酸糖肽化学成分研究
本文采用的方法不同于之前日本组，通过对鸡蛋的预处理，进而运用半制备高效液相来制备SGP。优点在于，本方案较于之前的日本组，周期短，产量高，因为在市场上SGP的价格一般在1Wrmb/mg，故周期和收率对于本方案来说是相当具有研究价值的。
3 实验部分
3.1 实验仪器
在实验过程中所用仪器列表表示如下：
表3.1 实验所用仪器
仪器 测试项目
SENCO旋转蒸发仪
THERMO低温高速离心机
FD-1 冷冻干燥机
LC-3000 型高效液相色谱仪 蒸发溶剂
除去溶液中固体物质
除去溶液中的水分
检测各物质的出峰时间
3.2 实验化学试剂
在实验过程中所用化学试剂与药品列表表示如下：
表3.2 实验所用化学试剂与药品
化学试剂与药品 级别 生产厂家
苯酚
丙酮
乙酸乙酯
乙醚 分析纯（AR）
分析纯（AR）
分析纯（AR）
分析纯（AR）
国药集团化学试剂有限公司
国药集团化学试剂有限公司
国药集团化学试剂有限公司
国药集团化学试剂有限公司
3.3 实验材料
未受过孕的母鸡鸡蛋，分离蛋黄和蛋白，以备实验使用。
3.4 实验分析
HPLC梯度洗提：就是载液中含有两种（或更多）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的配比和极性，通过载液中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。
标准曲线的测定，目的是分析SGP在于分析型高效液相中的出峰时间，进而为之后的制备做铺垫。[梯度：30min，0~20%乙腈]【定量、定性】
取标准品（SGP）10mg，配置成浓度为10mg/mL。
一、将该浓度SGP依次稀释至0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL，然后依次取20ul[质量为2ug、4ug、6ug、8ug、10ug]打入分析型HPLC，测得不同浓度下的峰面积，见下表格，图见附录1。通过对标准品的检测，确定SGP在该梯度下的保留时间为13min左右，同时能够根据不同浓度下的标准峰面积来制作SGP标准曲线，图见附录2
下一篇：牛奶香香韵在香精中的应用研究