缓释型丁香精油配方的设计及其蒸汽抑菌研究(6)
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2.1.3 丁香精油
丁香精油（clove oil）购自上海东氏香精香料有限公司，封装于白色塑料瓶中，于冰箱中4℃保藏。
2.1.4 病原菌与培养基
灰葡萄孢霉（Botrytis cinerea）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。使用灰葡萄孢霉、酿酒酵母前用PDA斜面培养基28℃培养5-7d。使用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌前用NA斜面培养基37℃培养24h。
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌悬液的制备：把活化后的菌挑取一环接种到已装有50mLLB液体培养基的三角瓶中，在37℃、200r/min在培养24h，备用。
灰葡萄孢霉孢子悬浮液、酿酒酵母细胞悬浮液的制备：已培养5-7d的斜面中加入3-5mL的无菌水，用接种环刮下菌，至离心管内用无菌水稀释，血球计数调至所需浓度，备用。
营养琼脂培养基（NA）配制方法：称取33g样品，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌20min，备用；LB液体培养基配制方法：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，加热溶于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌20min，备用；NYDB培养基配制方法：5g酵母粉，10g葡萄糖，8g牛肉膏，于1000mL蒸馏水中溶解煮沸，121℃高压灭菌20min，备用；PDA培养基配制方法：200g马铃薯去皮加水煮沸30min后用纱布过滤，于滤液中加入20g葡萄糖和20g琼脂，蒸馏水定容 至1000mL，121℃高压灭菌20min，备用或者PDA粉末40g，于1000mL蒸馏水中煮沸溶解，趁热过滤，分装，121℃高压灭菌20min，备用。
2.2 实验方法
2.2.1 丁香精油微胶囊的制备
丁香精油微胶囊的制备方法参照叶琳的论文[10]，并作适当修改，通过测定微胶囊粒径大小选出粒径最小的配方。具体方法是：①壳聚糖溶液的制备：100mL蒸馏水，壳聚糖1.5mg/mL，加醋酸1.5倍，超声波溶解60-70min。②精油乳液的制备：100mL蒸馏水，0.5mg/mL多聚磷酸钠，香精0.05%，0.1%，0.3%（总量），乳化剂（吐温-80）0.1%（总量），乳化40-50min。③将精油乳液装入酸式滴定管中，以4s/d的滴速滴加到壳聚糖溶液中，同时壳聚糖溶液用磁力搅拌器进行一定转速的搅拌，直至100mL的香精乳化液滴加完为止。④加入0.25g/（g壁材）的固化剂戊二醛，并用磁力搅拌器搅拌40min[11]。⑤保鲜膜封口，于4℃冰箱中保藏，备用。
2.2.2 丁香精油微胶囊包埋率的测定
选取上一步实验测出的粒径最小配方的微胶囊进行下面的实验。取适量丁香精油微胶囊用孔径〈150nm的滤膜进行抽滤，得固体湿微胶囊，于冰箱冷冻室中预冻24h，再于冷冻干燥机中冷冻干燥，得到固体干微胶囊粉末。
参照李荣等[12]的方法测微胶囊的包埋率：
①测定波长的选择：取0.1mL丁香精油标准品，用无水乙醇定容至50mL作为丁香精油储备液。准确吸取一定量的丁香精油储备液，用无水乙醇稀释1250倍后作为丁香精油工作液。以无水乙醇为空白，工作液在200-350nm时进行波长扫描。分别再取丁香精油工作液1.0，2.0，2.5，3.0和4.0mL，用无水乙醇定容至50mL，在前面所获得的最大吸收波长（207nm）条件下测吸光度。通过吸收强度对丁香精油浓度作图，即可得到丁香精油对吸光度的标准工作曲线。