不同提取方法对茶树花多糖性质的影响文献综述和参考文献(3)
2.1 酶法提取
酶法是通过酶反应将原料组织分解，加速有效成分的释放和提取，选择适宜条件将影响提取的杂质分解去除，促进某些极性低的脂溶性成分转化成糖苷类易溶于水的成分，降低提取的难度。这种方法具有条件温和、易去除杂质、回收率高和节约能耗等优点，因此，酶法提取的应用前景十分广阔。由于酶具有专一性和选择性的特点，应用时多采用复合酶。需要注意的是一组酶之间的协同关系、底物、抑制剂和酶的浓度，还要注意酶解设备与工艺参数，如粉碎、粉碎设备、温度和时间等。
2.2 多糖的分离纯化
在提取得到了多糖的粗样品之后，就要对其进行分离纯化，以备对其活性与结构的研究。分离纯化的技术有：色谱、膜分离。
2.2.1 色谱法分离纯化
色谱包括凝胶色谱和离子交换色谱。凝胶色谱是一种分辨率低、载样量少的分离技术，但方法简单、快速。常用的凝胶有葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶，以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂，从而使不同大小的多糖分子得到分离纯化，但不适宜粘多糖的分离。离子交换色谱通过载体表面带电基团与样品离子和淋洗离子进行可逆交换、离子偶极作用和离子吸附实现色谱分离。不同多糖尤其是多糖与蛋白质结合在一起的复合多糖，在一定条件下，所带电荷不同，则可根据各多糖上电荷的差异而达分离目的。
2.2.2 膜分离
膜分离技术是一项新兴的高效分离技术，分离过程以选择透过性膜作为分离介质，通过在膜两侧施加某种推动力（如压力差、化学位差、电位差等），使原料液中组分选择性通过膜。以压力差为推动力的膜分离过程包括微滤、超滤、纳滤、反渗透，根据蹄分原理使某些组分选择性透过，实现提纯和浓缩[12]。
3 多糖的结构分析
多糖由于其重要的生物学功能，越来越受到人们的关注，而其复杂的结构，也吸引了更多的国内外学者。目前，多糖结构的研究方法主要有以下几种，只有多种方法结合才能解析其结构。
3.1 高碘酸氧化及Smith降解
高碘酸可以选择性断裂分子中的连二羟基或连三羟基处，生成相应的甲酸、多糖酸或甲酸。反应定量的进行，每断开一个Ｃ－Ｃ键则痛耗一分子高贼酸。根据测定消耗的高规酸量和生成的甲酸量，判断糖昔键的位置、直链多糖的聚合度、支链多糖的分支数目等。一般情况下，高碘酸需要结合Smith降解和甲基化实验才可能得出最后结论。
Smith降解是将高碘酸氧化产物还原后进行酸水解或部分酸水解。由于糖基之间以不同的位置缩合，用高碘酸氧化后则生成不同的产物。将氧化产物用硼氢化合物（如硼氢化钾或硼氢化钠）还原成稳定的多羟基化合物，经酸水解后用纸层析或气相层析鉴定水解产物，由降解的产物可以推断糖苷键的位置。
3.2 甲基化反应
测定多糖中糖链的各种单糖残基的连接方式，甲基化是必不可少的方法。其基本原理是：先将多糖中各种单糖残基中的游离哲基全部甲基化，然后将多搪中的糖巧链水解，水解后得到的化合物，其経基所在的位置，即为原来单糖残基的连接点。同时根据不同甲基化单搪的比例可Ｗ推断出这种连接键型在多糖重复结构中的比例。多糖甲基化的方法有Haworth法、Knhn法、Purdie等，目前常用的方法是Haworth法的改良版。
3.3 质谱法
质谱的基本原理是；将待分析的样品在离子源中经一定的方式发生电离而形成带电的分子或分子碎片，在质谱仪中，借助电场或磁场作用，这些带电离子根据质荷比（m/z）的不同而得以分离，检测器通过多次扫描，记录各种离子的m/z值以及相应的强度，通过数据处理给出以m/z为横坐标，以相对强度为纵坐标的质谱图。质谱分析的关键点是使样品发生离子化。
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