磁性材料固定化腈水解酶的研究(6)
（3）交联酶聚集体或者晶体
使用双官能团的试剂来准备无载体的大型颗粒。
由于很大部分载体没有催化作用，载体的使用可能会造成酶活性的降低，从而造成了很低的成产率。此外，酶在载体上的固定化往往导致超过50%酶本身活性的丢失[38]。特别是载体上酶的装载量很高的情况下。而且在缺乏一个明确的方向来指导载体的生产情况下，固定化酶的载体设计往往是需要通过大量的尝试和失败之后才能成功。因此，固定化酶研究的兴趣慢慢的转向没有载体的固定化酶，比如交联酶晶体[39]，和交联酶聚集体[40]。
（4）吸附法
利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法。通常有物理吸附法和离子吸附法。
常用吸附剂有活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等。
吸附法固定酶的方法，其操作过程方便、反应条件绿色温和，而且不会引起酶变性或失活，且载体廉价易得，可反复使用，更降低了实验的成本。
1.6 研究意义与内容
1.6.1研究意义
酶的固定化可保持游离酶温和的反应条件以及高效的催化效率的同时,具有分离回收容易、可以多次使用、而且存储稳定性高、对环境污染小，工业上操作便捷等更种优势而受到研究者越来越多的关注。故此本课题的研究具有很大的现实意义，和操作的必要性。
1.6.2研究内容
配制适宜的培养基，从而培养重组大肠杆菌，将培育好的大肠杆菌破碎离心，取其上清液，即得到粗酶提取液，并测定其活酶性。通过亲和吸附法将腈水解酶与四氧化三铁载体（磁珠）结合，使其成为具有易分离回收，可多次使用的固定化酶。研究磁珠固定化量，固定化时间对固定化的影响。温度，pH值等对固定化酶的影响，并与游离的腈水解酶对比。
2 实验原理和流程
本次实验采用固定化方法是亲和吸附法。载体为镍离子螯合磁珠，其原理是金属鳌合配体与蛋白质表面的供电子氨基酸-组氨酸的咪唑基、半胱氨酸的巯醇基等( 其中以组氨酸最为重要) 以配位作用紧密结合的特点, 达到对蛋白质进行分离和纯化的目的。
金属鳌合载体对固定到表面的蛋白质构象影响小 , 而且具有配基简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强、载体可重复利用，该磁珠无需将粗酶分离纯化可直接固定化。
本次试验采用镍离子螯合磁珠亲和吸附重组大肠杆菌内的腈水解酶为例，来进行磁性材料固定化腈水解酶的研究。
具体流程：
1.大肠杆菌的培育
2.大肠杆菌的破碎离心的研究
3.大肠杆菌粗酶固定化条件优化研究
4.固定化酶的性能研究
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