磁性纳米材料固定化微杆菌细胞的研究(7)
Span-80 A.R. 上海凌峰化学试剂有限公司
麦芽糖 A.R. 上海楷洋生物有限公司
酵母粉 A.R. 英国oxoid公司
无水乙醇 A.R. 上海凌峰化学试剂有限公司
丙酮 A.R. 国药集团化学试剂有限公司
无水氯化钙 A.R. 上海衢州巨化试剂有限公司
25%戊二醛 A.R. 国药集团化学试剂有限公司
液体石蜡 A.R. 上海凌峰化学试剂有限公司
3.1.3 主要仪器
表3.2 主要仪器
名称 型号 生产厂家
摇床 HYG-II型 上海新星自动化控制设备成套厂
洁净工作台 上海汇龙仪表电子有限责任公司
台式离心机 TGL-16B 上海安亭科学仪器厂
高速离心机 H1650-w 长沙湘仪离心机仪器有限公司
液相色谱分析仪 486 沃特世科技（上海）有限公司
紫外分光光度计 7504 上海菁华科技仪器有限公司
pH计 ZD-2 上海雷磁仪器厂
电热恒温水浴锅 DK-S24 河南省太康教材仪器厂
立式压力蒸汽灭菌器 LDZX-30FBS 上海申安医疗器械厂
超声波清洁仪 PS-40L 深圳市科洁超声有限公司
3.2 实验方法
3.2.1 磁性壳聚糖Fe3O4纳米材料的制备
将0.2 g壳聚糖溶于20ml，5%(v/v)的醋酸水溶液中，待壳聚糖完全溶解后，加入200nm 的磁性Fe3O4颗粒0.2g，超声20 min使混合均匀。置于40℃水浴中，机械强烈搅拌下将的醋酸水溶液和Fe3O4微粒分散于装有40ml液体石蜡和5ml Span-80的三口烧瓶中，继续搅拌30min后加入25%(v/v)的戊二醛3ml，机械搅拌反应4h。用石油醚充分洗涤产物，每次用磁铁分离，并用丙酮洗涤脱水，再用乙醇和蒸馏水各洗涤多次，备用。也可真空干燥24h，得到磁性壳聚糖Fe3O4纳米材料（Fe3O4/CS）。
（1）测定磁性Fe3O4 /CS纳米颗粒的红外光谱图
将磁性Fe3O4 /CS纳米颗粒放入光路，对材料进行扫描，即得红外光谱图，并对红外光谱图进行分析讨论。
（2）测定磁性Fe3O4 /CS纳米颗粒的X射线衍射
将磁性Fe3O4 /CS纳米颗粒放入样品台上，打开软件进行材料检测，即得X射线衍射图，并对X射线衍射图进行分析讨论。
（3）磁性壳聚糖Fe3O4纳米颗粒扫描电镜图
将分散好的磁性壳聚糖Fe3O4纳米颗粒滴于铜片上，干燥后将载有磁性壳聚糖Fe3O4纳米颗粒的铜片粘在样品座上的导电胶带上。进行材料的扫描，得到电镜图并进行分析讨论。
（4）磁性Fe3O4/CS纳米颗粒的磁滞回线
用磁滞回线测量仪测量磁性Fe3O4/CS纳米颗粒的磁滞回线，对其磁滞回线图进行分析讨论。
3.2.2 磁性壳聚糖纳米材料固定微杆菌细胞的实验方法
取巧克力微杆菌细胞的发酵液1ml离心（8000 rpm，5 min)，测定其OD，菌体用8%生理盐水洗涤三次，取一定量细胞溶于10ml 0.1M，pH7.0的磷酸盐缓冲液中，测定OD A0待用。将磁性壳聚糖Fe3O4纳米材料置于锥形瓶，用0.1M，pH 7.0的磷酸盐缓冲充分溶胀12h，超声20min使颗粒完全分散，用缓冲液洗涤干净。将10ml含有一定巧克力微杆菌细胞的磷酸盐缓冲液加入磁性壳聚糖Fe3O4纳米材料中，摇床震荡吸附4h。然后用磁铁吸附材料，以除去固定有细胞的磁性材料，洗涤后的菌液合并，并剩余菌液测定OD A1，吸附率AD=( A0—A1)/ A0 ×100%，若AD值越大，则说明吸附后的菌液中所含细胞越少，因而吸附效果越好。将吸附有细胞的磁性材料置于4℃冰箱内，储存备用。