表达传染性法氏囊病毒VP2和法氏囊素三肽嵌合基因重组火鸡疱疹病毒的构建(4)
1.5.2 脂质体转染
将质粒pUA2B2-BS10-VP2-gpt提取出来，然后进行纯化，按脂质体(Lipofectamine TM 2000)使用说明书的方法转染CEF，具体步骤如下：
(1)在我们开始进行转染的前一天，将生长比较好的原代成纤文细胞（CEF）的单层细胞用胰酶进行消化，然后在每个孔中加入0.5-2 x 105细胞和500ul无抗生素的培养基。等到生长到一定程度时，一般为生长到90％-95％满的时候，在细胞单层上按0．1 TCID50的MOI(multiplicity of infection，感染复数)量接种HVT
细胞培养液，37℃吸附1 h。
(2)DNA-脂质体混合物的制备：
a．我们将使用50 ul没有血清也没有抗生素的DMEM培养基稀释1 ug转移质粒载体pUA2B2-BS10-VP2-gpt DNA。
b．在使用前临时将所需的2 ul脂质体用48 ul无血清DMEM培养基稀释，轻轻混匀，
室温孵育5 min。
c．将a所得和b所得混合(总体积100 ul)，轻轻摇动，使其混合均匀，室温孵育20 min。
(3)将上述复合物添加到用没有血清DMEM溶液洗涤1次的细胞培养孔中，轻轻摇晃，使其混合均匀，于37℃CO2培养箱中培养4-6 h。然后加入DMEM文持液，继续培养。
转染后的CEF细胞置于37℃、5％CO2细胞培养箱培养3-5 d，在荧光显微镜下观察蚀斑。