传染性法氏囊病病毒（IBDV）结构蛋白VP3及其突变体的表达纯化(3)
表3 12% SDS-PAGE分离胶
试剂名称 H2O 30%Acrylamide Tris-HCl
(pH=8.8) 10%SDS 10% APS TEMED
用量 3.3 mL 4.0 mL 2.5 mL 100 μL 100 μL 4.0 μL
按顺序添加试剂，每加一种试剂就立即充分混匀，混匀后，尽快灌胶，避免局部或整体凝固。
表 4 5% SDS-PAGE浓缩胶
试剂名称 H2O 40%Acrylamide Tris-HCl
(pH=8.8) 10%SDS 10% APS TEMED
用量 2.4 mL 0.5 mL 1.0 mL 40 μL 40 μL 4.0 μL
待下层分离胶配好，凝固30 min-1h后配制浓缩胶
表5 SDS-PAGE电泳缓冲液
.试剂名称 甘氨酸 Tris-Base SDS
用量 18.4g 3.0g 1.0g
去离子水搅拌溶解定容至1L，常温放置备用，现配现用。转膜缓冲液，在电泳缓冲液的基础上加入20%的无水乙醇即可，转膜缓冲液现配现用。
表6 考马斯亮蓝染色液
试剂名称 考马斯亮蓝R-250 甲醇醇 冰醋酸 ddH2O
用量 2.5g 400 mL 100 mL 500 mL
考马斯亮蓝染色液按上表格配置充分溶解好常温放置备用，染色液可反复使用，考马斯染色液毒性较大，且挥发性较强，需在通风橱或密闭容器中进行染色。
表7 考马斯亮蓝脱色液
试剂名称 甲醇 冰醋醇 ddH2O
用量 400 mL 100 mL 500 mL
考马斯脱色液按上表格配置并充分混匀常温放置备用，由于很容易挥发，且极其刺鼻，需在通风橱中操作，或在密闭容器中保存及进行脱色实验。
1.1.5 蛋白质纯化试剂
上清洗脱缓冲液；包涵体洗脱缓冲；上清溶解缓冲液；包涵体溶解缓冲液；IPTG； PBS；部分试剂具体配制方法列于下方表8、9。
表8 异丙基硫代半乳糖苷 ( IPTG )
试剂名称 IPTG ddH2O
用量 1.2g 40 mL
按上述表格预先配置好IPTG母液，再用0.22 μm进口滤器在无菌环境下过滤，母液冻存在-40℃冰箱备用，使用时按照对应比例稀释使用。
表9.碱性磷酸盐（PBS）
试剂名称 NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4
用量 8g 0.2g 1.44g 0.20g
蒸馏水溶解定容至1L，洗膜专用PBS（PBST）添加1/1000 吐温20，混匀备用；重悬菌体专用PBS采用去离子水溶解定容并高压灭菌备用，无需加吐温20。
1.1.6 Western-blot试剂及抗体
转膜Buffer；TBST；PVDF膜；封闭液为TBST配制的5%脱脂奶粉；增强型HRP-PAB底物显色试剂盒。一抗为高免兔血清（封闭液稀释比例为1:2000），二抗为羊抗兔IgG（封闭液稀释比例为1:10000）。部分试剂具体配制方法列于下方表。
表10 转膜Buffer
试剂名称 Gly Tris SDS 甲醇
用量 2.9g 5.8g 0.37g 200ml
去离子水定容至1L。
表11 TBS
试剂名称 Nacl 1M Tris-HCl（pH8.0） Tween