降糖药GLP-1外源性DNA残留检测(2)
2.2 受试药品利拉鲁肽工艺过程Ⅴ冻干粉；批号：A\B\C利拉鲁肽工艺过程Ⅶ冻干粉；批号：A\B\C成品冻干粉；批号：A\B\C研制单位：江苏万邦生化医药股份有限公司。2.3 仪器与耗材荧光酶标仪：Twinkle LB970,RERTHOLD；WH-3微型旋涡混合仪：GENIE；黑色96 孔板：Costar 39252.4 方法2.4.1 DNA 残留测定方法PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒是基于使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的方法【4】。
2.4.1.1 样品储备液配制分别精密称利拉鲁肽工艺过程Ⅴ样品、 工艺过程Ⅶ 样品和成品各 100.0mg，置于 10ml 容量瓶中，用样品稀释液(TE Buffer)溶解，并定容至 10ml，分别制得样品溶液10.0mg/ml，分装，置于 4℃冰箱保存备用。2.4.1.2 DNA 测定操作步骤（1）工作染色液：试验开始前，将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液室温融化，临用前精密吸取10ul 染色液加入2ml 稀释液中，混匀即得，避光保存。（2）DNA 标准品的配制：精密称取 BSA 10mg，加1900ul 稀释液与100ul DNA标准液，混匀，制成DNA 浓度为100ng/mL、BSA 为0.5%的标准品溶液。（3）酚氯仿法处理：取待处理的标准品溶液、供试品溶液各 700ul，加入700ul 的饱和酚溶液，置涡旋仪上充分振摇 10min，然后高速离心机 10000rpm离心10min；取上层水相，加入等体积的三氯甲烷，置涡旋仪上充分振摇 10min，同上离心，取上层水相，于通风橱中开盖放置 30分钟，将残留三氯甲烷挥发干净【2】。
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