聚乙烯微孔过滤膜处理纯水的性能研究(8)
2.4.3供试液的配置与稀释
（1）供试液的配置：
取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。供试液的制备若需要水浴加温时，温度不应超过45℃，时间不得超过30min。
（2）供试液的稀释：
a.取2～3支灭菌试管，分别加入9mlpH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液灭菌稀释剂（此时操作一般为：左手执试管并将塞打开，倾斜，右手执10ml吸管吸量。切勿在酒精灯火焰的正上方操作，以免火焰将供试液中的菌细胞杀灭）。加稀释剂后，试管塞应立即塞上。
b.另取1支1ml灭菌吸管吸取供试液1ml，加入上述装有9mlpH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液的试管中，混匀，即1:10供试液。
c.取1支1ml灭菌吸管吸取1:10均匀供试液1ml，加入装有9mlpH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液的试管中，混匀，即1:100 供试液。以此类推，根据供试品污染程度，可稀释至1:103、1:104 等适宜稀释级。每递增1稀释级，必须另换一支吸管。
2.4.4平皿法检查微生物限度
（1）取样
在上述进行10倍递增稀释的同时，以该稀释级吸管，吸取该稀释级供试液各1ml至每个直径90mm的灭菌平皿中，或从高稀释级至低稀释级吸液时可用1支吸管吸供试液各1ml 至每个灭菌平皿中。每一稀释级每种培养基至少注2～3个平皿，（一般为左手执平皿，将盖半开，右手执吸管），注皿时，将1ml供试液慢慢全部注入平皿中，管内无残留液体，防止反流到吸管尖端部。
（2）阴性对照
待注皿完毕后，用1支1ml吸管吸取稀释剂（pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液）各1ml，分别注入4个平皿中。其中2个作细菌数阴性对照；另2个作霉菌、酵母菌数阴性对照。如另用YPD琼脂测定酵母菌数时，则再增加2个平皿作酵母菌数阴性对照。
（3）倾注培养基
将预先配制好的细菌计数用的营养琼脂培养基；霉菌、酵母菌计数用的玫瑰红钠琼脂培养基；含蜂蜜、王浆液体制剂用玫瑰红钠琼脂培养基（霉菌）和YPD琼脂培养基（酵母菌）溶化，冷至约45～50℃时(保持完全溶化)，倾注到上述各个平皿约15ml，以顺时针或逆时针方向快速旋转平皿，使供试液或稀释液与培养基混匀，置操作平台上待凝。在旋转平皿时切勿将培养基溅到平皿边及平皿盖上。
（4）培养
细菌计数平板倒置于30～35℃培养箱中培养3天。霉菌、酵母菌计数平板倒置于23～28℃培养箱中培养5天，必要时延长至7天。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。
（5）落计数
a. 一般情况计数
一般将平板置菌落计数器上或从平板的背面直接以肉眼点计，以透射光衬以暗色背景，仔细观察。勿漏计细小的琼脂层内和平皿边缘生长的菌落。注意细菌菌落、霉菌菌落和酵母菌菌落与供试品颗粒、培养基沉淀物、气泡、油滴等的鉴别。必要时用放大镜或用低倍显微镜直接观察，或挑取可疑物涂片镜检。
b.微生物制剂的计数
若供试品为微生物制剂，应将有效微生物菌落排除，不可点计在细菌、霉菌和酵母菌数内。排除的方法需按该制剂微生物品种而定，并须观察菌落特征及染色形态。
c.供试品稀释液常含有不溶性原料、辅料，培养基注皿后亦可能产生沉淀物，经过培养后有时形成数量很多的有形物，且难与菌落相鉴别。为了有利于菌落计数，可在操作时将适宜稀释级的供试液多增加注皿（1～2个平皿），注皿后不经培养而放置于冰箱（勿结冻）中，在计数菌落时作为对照。或用0.001﹪TTC营养琼脂注皿，经培养后该培养基生长的菌落为红色，衬于白色背景上易于点计细菌菌落和区分其他有形物。有些软膏等非水溶性供试品，经营养琼脂注皿后呈乳白色，培养后生长的菌落不易辨认和点计，为防止这种情况，也可用0.001﹪TTC营养琼脂注皿。