氢气对菲处理下甘薯叶片相关基因表达量的影响(2)
2.实验步骤 2.1 实验材料： 徐薯 22大小形态相似的叶片 2.2 植物培养与处理: 挑选大小合适、形态健康的徐薯 22的叶片 40片，分四组，每组个十片叶片;菲溶液的配置：称取 0.2g菲于小烧杯中，加入 50mL丙酮溶液混合溶解，保存待用;配置 2L Knop 溶液，将 PH调至5.8，取四个烧杯并做好标记（1、 2、 3、 4），向四个烧杯中各加入 400 mL，Knop 溶液，将第一个烧杯中的溶液均分到有徐薯22叶片的十个培养皿中，盖好盖并做好标记（CK），放入培养箱中培养；向第二个烧杯中加入2mL的菲溶液，混匀，并将其均分到有徐薯 22叶片的十个培养皿中，盖好盖并做好标记（PHE），放入培养箱中培养；将第三个烧杯中的溶液均分成两份，其中一份通氢气 45分钟，另一份加入 1mL的菲溶液，将处理好的两份溶液又重新混合在一起，混匀，将其均分到有徐薯 22叶片的十个培养皿中，盖好盖并做好标记（PHE+H2），放入培养箱中培养；将第四个烧杯中的溶液通氢气1小时后，将其均分到有徐薯22叶片的十个培养皿中，盖好盖并做好标记（H2） ，放入培养箱中培养。24小时后换液及滤纸，连续培养 6天后保存样品。 Knop溶液配方： 药品 硝酸钙 硫酸镁 硝酸钾 磷酸二氢钾 氯化铵 铁盐（200x） 质量（g） 0.4g 0.1g 0.1g 0.1g 0.1g 2.5mL 加超纯水至 1L。
2.3 样品保存 将四种处理的叶片用超纯水漂洗干净之后，用铝箔将其包好并做好标记，分装并于-80℃的冰箱中保存。 2.4 提取 RNA 称取约0.1 g的甘薯根组织，液氮研磨成粉末，然后加入1 mL的Trizol试剂，盖紧盖子，充分剧烈振荡 15 s，于室温静置 5min，4 ℃ 12000 rpm 离心 10min。之后加入1mL氯仿，振荡后于 4 ℃ 12000 rpm 离心10 min。离心后样品发生分