荧光定量PCR使用的是康为世纪公司的2× GoldStar TaqMan Mixture(with ROX)混合液进行反应，反应体系为20ul，以质粒作为阳性对照，去离子水为空白对照，具体反应体系如表5。

依据定量引物的MIX的要求，本实验采用两步法进行PCR扩增，根据该基因引物的退火温度及荧光基团淬灭温度设定该基因的反应条件如表6。来,自,优.尔:论;文*网www.chuibin.com +QQ752018766-

3结果分析

3。1 DNA提取结果

    使用改良的CTAB法提取总DNA，待测样品和阴性对照各做3个重复，DNA提取结果如表7所示。

 由于核酸在260nm有最高吸收峰，蛋白和酚类物质在280nm有最高吸收峰，碳水化合物在230nm有最高吸收峰。因此，A260/A280和A260/A230可以代表核酸的纯度，一般如果样品DNA的A260/A280比值范围在1。7-2。0，A260/A230的比值大于2。0，则样品的纯度较好。通过对比，在兼顾浓度和纯度的前提下，本研究选择D3和N3作为模板进行后续试验。

3。2 定性PCR检测

本实验初步建立了NOS终止子的定性PCR检测体系，通过对待测样品的PCR扩增，电泳分析得到电泳图谱