酵母提取物(yeast extract) 5 g

氯化钠(NaCl) 10 g

琼脂(Agar) 16 g

定量称取上述物质于烧杯中，加纯水至1000 ml, 用5mol/L NaOH（约0。2ml）调pH至7。2，121℃灭菌20 min。若为液体培养基，则不加入琼脂条。

（2）KB培养基(1000ml)的配置，见表3 

表3  KB培养基配方

Table 3 KB medium formulation

试剂名称 m(g)

胰蛋白胨 20g

MgSO4·7H2O 1。5g

K2HPO4 1。5g

甘油 10ml

琼脂 15g

定量称取上述物质于烧杯中，加纯水至1000 ml, 用5 mol/L NaOH（约0。2ml）调pH至7。2，121℃灭菌20 min。若为液体培养基，则不加入琼脂条。

1。2。2 抗生素

本研究所涉及的抗生素种类以及使用浓度见表4

表4 抗生素及其使用浓度

Table 4 Antibiotics and their use concentrations

抗生素 缩写 溶剂 使用终浓度μg/ml

卡那霉素 Kn H2O 25

氨苄青霉素 Amp H2O 100

1。3 试验试剂与器材

1。3。1 试验试剂

本课题所用的酶为TaKaRa公司的产品；质粒提取试剂盒、切胶回收试剂盒来自捷倍思生物公司；细菌基因组DNA提取试剂盒来自天根生化科技有限公司；实验所需引物由南京金斯瑞生物技术有限公司合成。

1。3。2 试验器材

超速离心机、涡旋振荡仪、超净工作台、高压灭菌锅、烘箱、冰箱、28 ℃培养箱、恒温摇床、37 ℃培养箱、微波炉、电子天平、电热恒温水浴锅、多功能水平电泳槽、稳压稳流电泳仪、PCR仪、紫外凝胶成像仪、分光光度计、普通显微镜、电子显微镜、荧光显微镜。

1。4 供试线虫

实验所用线虫为秀丽小杆线虫。秀丽小杆线虫是土壤中一种自由生活的线虫，成虫长1。0—1。5 mm，可在含有大肠杆菌的琼脂培养基上培养。它是一种在生物科学的发展中起着重要作用的模式生物。其生命周期短、繁殖力极强、培养方便。来;自]优Y尔E论L文W网www.chuibin.com +QQ752018766-

2试验方法

2。1 FitD基因缺失突变体的构建

2。1。1 引物的设计与合成

表5 构建缺失突变表达载体的引物

Table 5 Construction of primers for deletion mutant expression vectors

引物

Primers 引物序列

Primer sequence 来源

Source

FitD E-FP ctcggtaccctcgagggatccATGGCTTTTATGTCCAAGGACTTC This study

FitD E-RP agactgcaggtcgacaagcttTCAGGTCAGTGAAGGCACCAG This study

FitC FP gagctcggtacccggggatccTTCCGGTTCCGGCAAATC This study

FitC RP tgcctgcaggtcgactctagaTCAGTCCTTCATCTGCAGCGC This study

FitE FP aaggactgatctagagtcgacATGAGCAAACCCATGAATTCG