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高速逆流法分离纯化桑黄菌丝体的活性成分(4)
Oh G. S.等从桑黄菌丝体中提取分离出多糖,并且发现它有刺激体液免疫调节和细胞免疫调节的活性,具有诱导产生γ-干扰素和促进T淋巴细胞生长的作用,从而释放出很多的免疫刺激产物[24]。
(6) 消炎作用
桑黄胞内、外多糖PIP和PIE对二甲苯致小鼠耳肿胀的最高抑制率分别为41.68%和47.01%,均高于Kim S. H.等报道的桑黄子实体正丁醇提取物对巴豆油致小鼠耳肿胀41.5%的抑制率[25]。
(7) 抑制黄嘌呤氧化酶活性(治疗痛风)
在黄嘌呤氧化酶抑制试验中,发现桑黄提取物能够完全抑制尿酸(尿酸盐微结晶沉积于关节而引起局部粒细胞浸润及炎症反应的生成),有效地抑制黄嘌呤氧化酶的活性,因而对痛风有良好的疗效[26]。
(8) 抗诱变作用
Shon等研究了桑黄的大豆培养提取物的抗诱变效果,研究表明,桑黄菌丝水提取物具有抗诱变活性,它是通过提高醌氧化还原酶和诱变剂的活性以及诱变水平来抑制肿瘤,并起着重要作用的[27]。
(9) 对抗体形成细胞的影响
Kim H M等试验中使用抗原如:脂多糖(LPS)、三硝基甲苯脂多糖(TNP-LPS)、绵羊红细胞(SRBC)体内外刺激B细胞产生IgM来检测P. linteus菌丝体多糖在抗体产生中的作用,发现桑黄菌丝体多糖(100mg/kg)与SRBC一起注入体内,抗体形成细胞增加250%。体外实验,菌丝体多糖(1000ug/m1)作用,抗体形成细胞增加187%[28]。
1.3 高速逆流色谱
1.3.1 原理及特点
HSCCC利用单向流体动力学平衡原理,使2个互不相溶的溶剂相在高速旋转的螺旋管中单向分布,其中一相作固定相,由恒流泵输送载有样品的流动相穿过固定相,利用样品在两相中分配系数的不同实现分离。HSCCC的分析方法避免了有效成分被固相载体的不可逆吸附和峰形拖尾等缺点;且具有不使用固相载体,样品粗提物可进样分离,分离纯化与制备可同步完成,有机溶剂消耗少,无损失、无污染,高效、快速和大制备量分离等优点。与HPLC相比,HSCCC的进样量较大,最多可达几克,是HPLC的104-105倍;而与常压和低压色谱相比,HSCCC的分离能力强,有的样品经过1次分离就可以得到1个甚至多个单体,并且分离时间也较短,一般几个小时就可以完成1次分离[29]。
1.3.2
研究现状
中国加入WTO后,天然药物现代化发展显示出广阔发展前景,同时,对天然药物的分离技术也提出了更高的要求。HSCCC可以从复杂的天然粗制品中提取不同特性的有效成分,为天然药物的发展提供了有利条件,现在分离提取天然药物中黄酮、生物碱、蒽醌类衍生物、皂甙等有效成分方面,已获满意结果。HSCCC作为一种天然产物分离纯化的方法,效果非常理想。较高的进样量,较好的分离能力以及不会造成不可逆吸附等特点,决定了其在研究天然药物领域将得到越来越广泛的应用[30]。
1.4 研究目的与意义
桑黄菌是近年来开发的一种多年生药用真菌,经初步研究已经显示出它的药用价值,是目前国际公认的生物治癌领域中有效率排在第一位的真菌(巴西蘑菇,即姬松茸与其疗效相近)。目前国外主要用于制造防癌药品,提高人体免疫力, 提高人体精、气、神, 及养颜保健品, 并且已开发抑制爱滋病的新药。
由于外商需求量大,价格高,致使国内各产地进行掠夺性开采,子实体孢子无法大量形成。结果造成该资源在东北地区已经难觅踪影,西北也即将枯竭。再加上我国天然的桑黄数量本来就非常稀少,子实体的人工栽培尚处于起步阶段,所以要想形成稳定的医药工业产品来源,就必须充分挖掘桑黄的自然资源,深入开展桑黄的人工栽培;另外还要进行菌种的分离培养,利用现代生物技术进行深层发酵。同时,应进一步测定桑黄提取物中的有效成分,探索其与菌种、菌龄以及培养条件的关系,确定桑黄有效成分在提高人体免疫机能、疾病的预防和治疗等方面的作用机制,使桑黄能够早日应用于人类的医疗保健事业。桑黄的发酵研究报道已表明,桑黄菌丝体可替代子实体发挥其药效作用。在现有研究基础上,进一步优化桑黄发酵培养条件,以获得成本更低、周期更短的培养基组分和最适生长条件,使桑黄发酵培养工业化,大量获得桑黄菌丝体供市场之需和研究之用是桑黄发酵的当前之需。加大对发酵培养菌丝体和发酵液中有效成分的研究,开发新产品投入市场等是今后桑黄发酵研究之路。
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