高速逆流法分离纯化桑黄菌丝体的活性成分(5)
本论文主要是分离纯化桑黄菌丝体中的小分子活性物质，通过硅胶层析法和高速逆流色谱获得纯度较高的化合物，经实验测定化合物的成分及生物活性，最后得到桑黄菌丝体中能提高人体免疫机能、预防和治疗疾病的有效成分。
1.5 主要研究内容
本课题的研究有三个阶段：一是桑黄菌丝体醇提物不同萃取相的制备与鉴定，桑黄菌丝体经醇提、旋蒸后，依次用不同有机溶剂萃取2次，获得各相萃取物并浓缩保存；菌丝体经不同极性的溶液萃取后达到初步分级，采用颜色反应法来初步判断各萃取相可能含有的物质；二是用HSCCC对上述萃取相进行分离纯化并鉴定化合物成分；三是桑黄菌丝体不同分离组分以及单一化合物的生物活性实验。
主要研究内容如下：
(1) 桑黄菌丝体醇提物不同萃取相的制备：根据极性不同，对桑黄菌丝体醇提物进行初步分离，为之后的分离纯化做准备。
(2) 桑黄菌丝体醇提物不同萃取相鉴定：桑黄菌丝体经不同极性的溶液萃取后达到初步分级，采用颜色反应法，来初步判断个萃取相可能含有的物质，为下一步分离纯化做准备，这更有利于在上高速逆流色谱之前，条件的摸索提供依据和参考。
(3) 桑黄菌丝体乙酸乙酯部分的柱层析分离纯化实验：用硅胶柱层析的方法对乙酸乙酯部分萃取相分离纯化，该过程可得到较纯化合物及组分较少的混合物。
(4) 高速逆流色谱分离纯化实验：优化预试条件，确立最佳的色谱条件，上样，分离纯化，得到纯化化合物，进行结构鉴定。
(5) 桑黄菌丝体不同萃取相抗肿瘤活性测定：对HepG2肝癌细胞作用实验、对K562细胞增殖的抑制作用实验以及抗氧化活性。
(6) 单一化合物抗肿瘤活性活性实验：对HepG2肝癌细胞作用实验(AlamarBlue显色剂)、对K562细胞增殖的抑制作用实验(AlamarBlue显色剂)、体外抑制L1210肿瘤细胞生长实验(AlamarBlue显色剂)、对LNCaP细胞增殖的抑制作用实验、对SW620结肠癌细胞的作用实验、对MCF7乳腺癌细胞的作用实验。
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