小麦中产毒真菌的分离与鉴定+文献综述(3)
Tabada等调查了来自19个国家的500份谷物样品，发现DON的污染率为45%~50%。王晓云等[19]在2005 年了解我国粮谷类食物中DON的污染现状及评估居民DON 的暴露量的调查中发现中国6省粮食中DON污染率为66.46%， 平均DON含量玉米为25.88 μg/kg，小麦为50.04 μg/kg， 在DON污染含量95%百分位数以内，食品中污染呈高污染率、低污染程度的趋势。鉴于DON的危害性，我国制定了小麦、玉米及其制品中DON 的限制标准，均为1000 μg/kg[19]。
玉米赤霉烯酮（ZEA）由禾谷镰刀菌、三线镰刀菌等真菌产生，对人和动物的健康都具有潜在的危害， 具有强烈的雌激素作用， 作用强度约为雌激素的1/10， 表现出对生殖系统的毒性作用。ZEA毒性强，污染范围广，严重影响农作物的产量， 降低农作物的品质。
伏马毒素由串珠镰刀菌、轮状镰孢菌等产生，可分为伏马菌素B1（FB1）和伏马菌素B2（FB2）。伏马菌素具有神经毒性，可引起马的脑白质软化；慢性肾脏毒性，引起肾病变；除此之外，伏马菌素不仅是促癌物，其本身还有致癌作用。
串珠镰刀菌是污染玉米等粮食作物的主要真菌, 能产生多种毒素并给人类和动物造成很大的危害。研究表明, MON对人和动物有强烈的毒性, 并以心血管系统损害为特征。MON对动物有较强的毒性作用, 主要作用于增殖活跃的细胞, 如肝、脾、心肌、骨骸肌和软骨细胞等, 抑制细胞蛋白质DNA 的合成, 干扰细胞分裂增殖, 对生物膜通透性和各种酶活性有明显影响, 同时引起机体过氧化损伤。
真菌毒素不同于细菌毒素。真菌毒素是小分子物质, 极耐热, 毒性不因通常的加热而被破坏, 可引起多器官的损害, 而且具有远期致病作用等。更重要的是, 被真菌毒素污染的粮食在外观上是正常的,不易被人们注意。随着真菌毒素检测手段的进步,21世纪真菌毒素的研究必将是热门课题之一。
1.1.4产毒真菌的分离鉴定方法
（1） 常规鉴定方法
过去产毒真菌的分类鉴别一般采用形态学方法，主要按照真菌的形态、生理特点、抗原构造等特征加以区分。但是，常规的形态学检测方法存在一定的缺陷，如菌的种类较多、形态特征复杂、部分形态特征和生理生化指标随环境的变化而不稳定，种的水平上鉴别不准确、耗时长，且鉴定者需较强的的专业知识等[19-23]。
① 生物、生化方法这是一种传统、普遍使用、检测结果最直观的方法。寄主大至整株植物、离体器官、某一组织, 小至单个细胞、原生质体、细胞器或亚细胞器都可作为检测材料。前一类检测材料要求真菌毒素量大, 才有可能表现出明显的毒害症状, 但方法简单, 不需大型的仪器和设备; 后一类检测材料则适用于那些不易大量制备毒素的检测, 灵敏度高,效果也好, 包括皮肤毒性试验、致呕吐试验、种子发芽试验等。
② 物理及化学方法一些已知物理及化学性质的真菌毒素可用此法检测。该法主要用于毒素定量分析, 常用的有薄层层析法、高压液相色谱法和核磁共振法等。
③ 免疫化学方法免疫化学方法是近年来快速发展起来的一项实用新技术, 在微量毒物的检测中已得到广泛应用。其是利用抗原抗体反应的原理进行真菌毒素的检测, 一般采用灵敏度很高的放射免疫测定法( RIA) 或酶联免疫吸附试验( ELISA) 来检测样品中真菌毒素。与化学方法相比, 免疫化学方法具有特异性高、敏感性强、快速方便、不需要昂贵仪器设备等优点。与薄层层析法相比, 免疫化学方法的灵敏度提高了500倍, 样品前处理也得到一定程度的简化, 易于普及推广。[23]
（2）分子生物学鉴定方法
1） 常规PCR技术