小米糠固态发酵产抗氧化活性物质之间相互作用研究(3)
1.3.2 抗氧化活性研究
1.3.2.1 T-AOC测定
根据T-AOC试剂盒的方法测定。抗氧化物质能将 Fe3+还原为Fe2+，而 Fe2+能与菲啉类物质形成稳固的络合物，在520 nm下通过比色测出其抗氧化能力的高低。定义在37℃下，为每分钟每毫升抗氧化物质使反应体系的吸光度（A）每增加0.01时，为一个总抗氧化活性单位（U）。各试验重复三个，取平均值。计算公式如下：
式中：T-AOC为总抗氧化活性（U/g小米糠）；A1为样品吸光值；A0为对照吸光值；V1 为反应液总体积(mL)，为3.7 mL；V0为取样量(mL)，为0.1 mL；m为稀释倍数，本试验中为10，表示每克小米糠加入10 mL的蒸馏水提取。
1.3.2.2 DPPH自由基清除能力测定
用蒸馏水将小米糠粗提液稀释6倍之后，根据Torres-Fuentes等[8]的方法稍作修改测定，取样品溶液2 mL，加入2 mL 的0.1 mmol/L DPPH自由基的95%乙醇溶液，混合摇匀，室温下避光反应30 min。然后用紫外分光光度计在517 nm下测定其吸光值。各试验重复三个，取平均值。样品对DPPH自由基清除能力计算公式如下：
式中：Aa作为样品吸收值；Ab作为空白组（用等量的95%乙醇代替DPPH溶液）；Ac作为对照组（用等量的95%乙醇代替样品）
1.3.2.3 还原能力测定
还原能力的测定根据Amza等[9]报道的方法，将1 mL的样品溶液和2.5 mL的磷酸盐缓冲液(0.2 M, pH6.6)混合，然后加入 2.5 mL 的1%铁氰化钾溶液，混合均匀，在 50 ℃下保温 20 min。冷水浴降温，之后加入 2.5 mL的 10% 三氯乙酸（TCA）溶液，混合均匀。取2.5 mL的上清液加入2.5 mL的蒸馏水，再加入 0.5 mL的0.1% FeCl3溶液混合均匀，室温下静置10 min，然后用紫外分光光度计在 700 nm 下测量吸光值，吸光值越高说明样品的还原能力越强。