一种肉物种鉴别方法设计(2)
然而，目前检测标准体系中现有的动物源性检测手段都只能做到定性或半定量，无法判断摻伪的严重程度，不能严厉打击假冒伪劣的不法商贩[14]。本课题的研究方法致力于提供一种较快速、准确、经济、实用的定量分析技术，不仅适用于生鲜肉，也适用于添加了大量添加剂的深加工熟肉制品，可以用于实际样品批量测试。项目检测方法若能在市面上得到广泛推广,对于我国乃至世界肉类食品市场想必都能起到良好规范作用，沉重打击肉类食品非法掺假的不良商贩，推动社会进步。
1 材料与方法
1.1材料、试剂、设备与仪器
鸡鸭猪牛羊 生鲜肉若干（特征多肽筛选阶段样品为市面上各大超市购买，-20℃冰箱保存，特征多肽验证阶段样品为南京市食品药品监督检察院扩项样品）
2%SDS-PBS缓冲液（二水磷酸二氢钠 0.624g，十二水磷酸氢二钠 2.148g， SDS 20g，水 1L，70℃搅拌至澄清）
BCA蛋白定量试剂盒：购于Thermo Scientific（美国）公司，货号：23225
Ultracel-3超滤管，每管处理量0.5 mL，截留分子量≥10 kDa
Trypsin 酶 (0.1ug/ul,200ul buffer加入到酶的玻璃瓶中，酶活力≥1645 units/mg，购于Sigma-Aldrich（美国）公司，货号：T7409)
ZipTip C18枪头（ZTC18S096）购自Millipore（美国）公司
Sep-pak plus C18柱（360mg吸附剂质量，粒径55-105um，孔径125A）
DTT（二硫苏糖醇），IAM（碘乙酰胺），NH4HCO3 ，乙腈， 甲酸 ，
尿素， 硫脲， Tris （三氨基甲烷），盐酸
T25匀浆机 德国IKA公司
CPA2245T25天平 德国Sartorius公司
Avanti J-C高速冷冻离心机 美国Beckman Coulter公司
M2多功能酶标仪 美国Molecular Devices公司
Nano LC-LTQ-Orbitrap XL MS/MS
纳升级液相色谱串联质谱仪器 美国Thermo Fisher公司
1.2 特征多肽筛选方法
1.2.1全蛋白提取
取2g肉样（去除结缔组织和脂肪），切碎，加入30ml2%SDS-PBS缓冲液，冰浴条件下匀浆9600rpm 30s 2次然后13400rpm 30s，每次匀浆间隔30s，然后4000g，4℃离心 10min后，上清液用纱布过滤，去除少量不溶成分，即为肌肉全蛋白溶液。