植物精油对肉制品的抗菌研究(6)
2.2.3 抑菌性能的测定
将待测悬菌液各取0.5mL在相应的固体培养基上均匀涂布，制成含菌平板。将直径为6mm的圆形滤纸片灭菌后分别放入精油中浸泡1h。随后取2张浸泡过精油的滤纸片贴在含菌平板上。每个培养皿中放置一片用无菌水浸泡1h的空白滤纸片进行对比试验。最后将培养皿放置于37℃恒温培养箱中，倒置培养24h。
抑菌圈的测定方法为精油滤纸片所产生的抑菌圈直径，平行测定三次，取平均值。本实验中分别选取3种精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌二种细菌的抑菌性进行测试，考察不同油对抑菌效果的影响。精油种类如表2.4所示。
序号 1 2 3
精油 肉桂 百里香 生姜
表2.4 精油种类一览表
2.2.4 最低抑菌浓度的测定
（1） 肉桂精油最低抑菌浓度的测定
取肉桂精油适量，用0.22pm的微孔过滤器过滤除菌，并用分析纯的乙醇稀释成具有一定浓度梯度的稀释液。吸取纯的肉桂精油1.6mL加入8.4mL分析纯乙醇中，制成16%精油稀释液，再从16%精油稀释液吸取4mL加入装有4mL的乙醇中，得到8%的精油稀释液，依次等比稀释后，分别制成16%、8%、4%、2%、1%、0.5%的精油稀释液，将稀释后的精油用摇匀后备用。从精油稀释液中吸取2mL到装有18mL约45摄氏度左右的固体培养基的小锥形瓶中，即精油浓度为1.6%、0.8%、0.4%、0.2%、0.1%、0.05%，将精油稀释液和呈液状的固体培养基充分混合，趁热倒入已经灭菌的培养皿中，摇匀、静止，待培养基凝固后将0.1mL菌悬液滴入固体培养基上，用灭菌涂布棒涂布均匀，置37摄氏度下培养24小时，以不生长菌落的精油浓度为肉桂精油的最低抑菌浓度。
（2）百里香精油最低抑菌浓度的测定
取百里香精油适量，用0.22pm的微孔过滤器过滤除菌，并用分析纯的乙醇稀释成具有一定浓度梯度的稀释液。吸取纯的百里香精油0.1mL加入7.9mL分析纯乙醇中，制成1.25%精油稀释液，从1.25%精油稀释液吸取2mL加入装有2mL乙醇中，得到0.625%的精油稀释液，从1.25%精油稀释液中吸取1mL加入装有9mL乙醇中，制成0.125%精油稀释液，从0.625%精油稀释液中吸取2mL加入装有2mL乙醇中，制成0.0625%精油稀释液，再从0.125%精油稀释液中吸取1mL加入装有9mL乙醇中，制成0.0125%精油稀释液。将稀释后的精油用摇匀后备用。从精油稀释液中吸取2mL到装有18mL约45摄氏度左右的固体培养基的小锥形瓶中，即精油浓度为0.125%、0.0625%、0.0125%、0.00625%、0.00125%。将精油稀释液和呈液状的固体培养基充分混合，趁热倒入已经灭菌的培养皿中，摇匀、静止，待培养基凝固后将0.1mL菌悬液滴入固体培养基上，用灭菌涂布棒涂布均匀，置37摄氏度下培养24小时，以不生长菌落的精油浓度为百里香精油的最低抑菌浓度。
（3）生姜精油最低抑菌浓度的测定
取生姜精油适量，用0.22pm的微孔过滤器过滤除菌，并用分析纯的乙醇稀释成具有一定浓度梯度的稀释液。吸取纯的生姜精油0.8mL加入9.2mL分析纯乙醇中，制成8%精油稀释液，从8%精油稀释液吸取5mL加入装有5mL的乙醇中，得到4%的精油稀释液，从4%精油稀释液中吸取4mL加入装有4mL乙醇中，得到2%精油稀释液，从4%精油稀释液吸取2mL加入装有6mL乙醇中，得到1%精油稀释液，从1%精油稀释液中吸取2mL加入装有6mL乙醇中，得到0.25%精油稀释液，将稀释后的精油用摇匀后备用。从精油稀释液中吸取2mL到装有18mL约45摄氏度左右的固体培养基的小锥形瓶中，即精油浓度为0.8%、0.4%、0.2%、0.1%、0.025%，将精油稀释液和呈液状的固体培养基充分混合，趁热倒入已经灭菌的培养皿中，摇匀、静止，待培养基凝固后将0.1mL菌悬液滴入固体培养基上，用灭菌涂布棒涂布均匀，置37摄氏度下培养24小时，以不生长菌落的精油浓度为生姜精油的最低抑菌浓度。