2.3.2.4阳性重组子的鉴定来,自|优;尔`论^文/网www.chuibin.com

(1) 根据白蓝斑筛选原则，选取白色单菌落至10μl无菌水中，用移液枪打混匀。

(2) 吸取1μl为模板，菌落PCR验证片段大小。

(3) l%琼脂糖电泳检测PCR产物，若载体自连，则无法检测到明显条带。

2.3.3 测序及基因的鉴定 

吸取5μl能扩增得到正确PCR产物的菌液至含有Amp+的LB液，37℃摇菌过夜，次日送测序。使用NCBI的BLAST和Expert Protein Analysis System进行分析结构域分析，利用SMART 4.0和NCBI的保守结构域搜索程序。分子量大小和等电点使用软件DNAMAN进行预测。