以自组装HA/RHB/DNA三元复合物为非病毒基因载体的制备表征与细胞学评价(2)
3.3.7 HA/RHB/DNA三元复合物压缩稳定性试验 20
3.3.8 肝素钠对HA/RHB/DNA三元复合物稳定性影响 21
3.3.9 血清对HA/RHB/DNA三元复合物稳定性影响 21
3.3.10 DNaseI对HA/RHB/DNA三元复合物稳定性影响 22
3.3.11 HA/RHB/DNA三元复合物细胞转染效率评价 23
4 结论 25
致 谢 26
参考文献 27
1 前言
1.1 研究背景
基因治疗在癌症、艾滋病等严重危害人类生命健康的疾病的治疗中有良好的开发前景。基因治疗的常见方法是将外源正常基因导入生物细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，比一般的药物治疗有更加彻底的疗效。将外源基因药物导入生物细胞必须依赖于载体的协助，因此高效的基因载体成为目前基因治疗研究的热点。基因载体通常可以分为两类：病毒载体和非病毒载体，病毒载体给药效率高，但是存在的安全隐患限制了其临床应用。
1.2 研究基础
在聚合物载体材料中，树状高分子是高度分支的聚合物，具有单分散性和完全均一的分子结构。一种新型还的原型聚胺基-胺（RHB）是一类由双丙烯酰胺与三胺单体发生Michael加成聚合得到高树枝状分子聚合物。RHB中含有仲胺和两种类型的叔胺（主链胺和侧链胺）。这样不同类型的胺组合在一起，有利于提高聚合物的转染活性。保护 DNA不被溶酶体破坏。由于RHB结构中存在二硫键，在体内生理条件下被细胞内还原型谷胱甘肽还原降解，使RHB高聚物降解成小分子化合物，不仅可以提高基因药物的细胞内转染效率，而且大大降低了材料的细胞毒性。
透明质酸（ aleuronic acid，HA）又名玻尿酸，是一种体内广泛存在于细胞外间质的酸性糖胺多糖， 富含羧基，荷负电。CD44是HA在细胞表面的特异性受体，与HA 非共价结合， CD44在正常的上皮细胞表达水平低，而在肿瘤细胞表面高表达。CD44是一种跨膜糖蛋白，主要参与异质性粘附，即肿瘤细胞与宿主细胞和宿主基质的粘附，异质性粘附在肿瘤细胞侵袭转移中起促进作用[1]。
1.3研究意义
恶性肿瘤，又称癌症，是一类严重危害人类生命的疾病，全球因癌症死亡的人数呈逐年增长趋势。多年来，肿瘤治疗一直是生命科学研究领域中关注的焦点，除外科手术、放射治疗之外，药物治疗是主要的治疗手段之一。很多具有显著细胞毒作用化学类药物、放射性药物被开发，由于缺乏特异性；随着血液循环分布到全身后不仅作用于肿瘤细胞的也作用于正常细胞，会引起很大的毒副作用。由此可见，肿瘤药物治疗效果的限制，很大程度上在于药物缺乏分布特异性。为了解决这一瓶颈问题，达到高效低毒的疗效，靶向药物输送成为提高疗效的一个重要途径。针对非病毒基因递送载体的靶向性、稳定性、安全性和高效性等关键问题，设计并构建高效、稳定、低毒的双靶向三元复合物非病毒载体。采用还原型超树枝化聚胺基-胺 (RHB) 作为载体材料与质粒DNA自组装压缩成纳米级复合物。
2文献综述
2.1 基因药物载体材料介绍
基因治疗是当前肿瘤治疗研究领域的热点。该技术应用的关键是需要一种安全、高效的基因给药载体系统。在这种情况下，非病毒载体基因递送系统就成为了热点研究对象。目前主要分别以脂质体，阳离子和高分子聚合物作为基因药物的载体。
2.1.1 脂质体作为基因载体
非病毒载体基因递送系统包括脂质体及其类似物，如阳离子脂质、聚阳离子脂质体、阴离子脂质体、pH敏感型脂质体、融合脂质体等。这些非病毒基因载体作为外源基因的载体具有如下优越性:制备简单，磷脂成分无毒，无免疫原性，可被细胞生物膜利用;可以运载不同大小的基因片段，还可以运载脂质DNA 而成为载体的载体;甚至可以运载染色体或细胞核，其容量大大超过其他载体;可以抵御核酸酶的作用，延缓基因降解;不需要病毒载体，安全可靠。