凝胶卡与试管技术在不规则抗体筛查中的应用比较(3)
1.2抗体筛选红细胞试剂盒介绍
抗体筛选红细胞是进行不规则抗体筛查的主要试剂。根据抗体类型和性质的不同，还须结合其他不同的试剂进行抗体筛查试验。主要方法有：盐水法；抗球蛋白法；凝聚胺法。
抗体筛选红细胞试剂盒所采用的原料是3个单人份O型红细胞。红细胞来源于健康献血员。用红细胞保养液制成2-5%红细胞悬液。3个O型红细胞上所带有的主要血型系统抗原经鉴定和确认，表现型与随试剂提供的红细胞抗原格局表所标示的抗原一致。抗体筛选红细胞表达下列抗原：D, C, E, c, e, Jka, Jkb, M, N, S, s, Fya, Lea, Leb, P1。1.3检测红细胞凝集反应的凝胶技术
玻片法和试管法以外的多种技术都可以检测红细胞凝集反应，但是在实际应用的广泛性上应首推凝胶技术。卡式凝胶配血法是现在国际公认的标准方法，已取代了传统的试管法及玻片法，国内也在逐渐推广开展。1987年Lapierre等人在公开发表凝胶技术之前，就申请专利并在欧洲开始试用；1995年凝胶技术开始在美国开始使用[16]。Lapierre等人发明的凝胶技术是将6根微型管柱连接而成一张凝胶卡，管柱中含有葡聚糖凝胶颗粒、缓冲液和红细胞特异性抗体，组成一个微型红细胞过滤装置。故凝胶技术又被称为凝胶微柱技术（gel microcolumn technology）。
1.3.1卡式凝胶法方法与原理
此法以经典的抗人球方法与先进的判读方法有机的结合成了一体。在透明的微柱内置有凝胶，内装有抗人球抗体，通过控制凝胶的浓度而形成一定的分子筛。分子筛具有一定的孔径，其孔径的 小决定了能通过的颗粒的大小。在凝胶层内加入红细胞和血浆，经过孵育、离心等程序，如果有抗原抗体反应，红细胞会形成不同大小的凝块，从而浮于凝胶的不同层面而不能通过分子筛；如果没有特异性的抗原抗体反应，红细胞则顺利通过凝胶达到管底，从而达到分离凝集红细胞和游离红细胞的目的，从而可以进行准确的结果判读。
凝胶技术的优点是需要血样量少、受检红细胞一般不需要洗涤、检测凝集反应的灵敏度高，红细胞凝集格局可以文持至少24小时，便于复读结果 。此外凝胶技术操作简便，目前已经可以全自动化操作，降低了手工操作误差。凝胶技术的弱点包括检测速度不如试管方法快，用于抗体鉴定的红细胞必须调整到所要求的浓度，受检血样中的血纤蛋白可能干扰红细胞凝集格局等。
1.3.2卡式凝胶法特点
（1）该方法为国际公认的安全输血的推荐方法，在国外已普遍采用。现在国内已逐步开始广泛应用。
（2）检测项目全，可应用于常规的ABO血型系统、Rh血型系统及其亚型、部分稀有血型（MN等十几种）系统的抗体筛查、抗体识别，直接、间接抗人球试验和交叉配血。
（3）灵敏度高于试管法、玻片法，它能捕捉到十分微弱的抗原抗体反应。
（4）特异性强，在许多试验中都加入了抗人球，以促进红细胞的特异性凝集。
（5）重复性好。采用标准化定量操作，最大限度减少操作人员的随意性。
（6）客观性好。由于采用凝胶分子筛技术，将凝集的红细胞和游离的红细胞分离开，使结果一目了然，避免了镜下的主观影响。
（7）自动化操作，可减少实验人员的误操作，最大程度地保障安全输血。
1.3.3抗人球蛋白凝胶技术
最初的抗人球蛋白试验是使用试管方法，多以0.9%生理盐水作为红细胞悬液介质。为了提高抗人球蛋白试验的敏感性，可以使用低离子强度溶液(LISS)代替盐水介质[5]，或是在反应体系中加入牛血清白蛋白、聚乙烯乙二醇(PEG) 等化合物[6]。1990年代，抗人球蛋白试验的固相方法问世[7,8]，1998年发明使用光吸收曲线评估固相抗人球蛋白试验的方法[9]。
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