基于蛋白质组学的云南白药治疗溃疡性结肠炎药效物质基础研究(2)
中药是我国传统医学领域的一块瑰宝，近年来其关注度持续上升。而云南白药作为传统中药，是我国的百年老药，其止血、化淤、抗炎等药理疗效享誉海内外，临床上使用云南白药保留灌肠法治疗UC疗效明显，患者耐受性好，且不良反应少于对照西药治疗组[3-6]。现代药理学理论认为中药具有多效多靶的作用特点，而蛋白质组学是一门研究某一类型细胞、组织、体液中的所有蛋白质组成、功能及其蛋白之间的相互作用的学科, 具有大规模、高通量、系统化等优点[7]。机体内的蛋白质在一定状态下是呈动态变化的，蛋白质组学的研究内容是比较细胞在不同生理或病理条件下蛋白质表达的异同，尤其是特定疾病状态下蛋白质的表达量、氨基酸序列、翻译后修饰及蛋白质三文结构等。近年来，蛋白质组学相关研究技术取得了飞速的发展，例如高分辨率质谱分析技术的出现等。随着技术的不断改进和新方法的涌现，蛋白质组学的应用范围也不断扩大。蛋白质是生命体生长、发育、代谢等生命活动的基础，各种疾病的产生机制和药物治疗靶点大多处于蛋白质水平，因而蛋白质组学非常适用于研究药物的作用机制、寻找有效的药物靶点及开发新药。
综上，许多研究人员都将蛋白质组学作为研究中药作用机制的一种有效手段。二文电泳联合质谱技术是国际公认且通用的蛋白质组研究技术的标准方法, 是蛋白质组学研究的核心技术之一,可将成百上千种蛋白质同时分离。二文电泳的原理是，利用各蛋白质等电点和相对分子质量不同来分离复杂的蛋白质组分，目前已成为复杂蛋白质组分分离、检测和分析的最好的生化分离技术之一。二文电泳具有以下优点：分辨能力强；可得到的信息量多，从二文电泳图谱上可以初步得到细胞或组织内蛋白质的分布范围、表达蛋白质的个数；能与质谱等蛋白质分析鉴定方法相匹配，并通过电脑进行分析处理[8]。但二文电泳容易受蛋白质分子量大小和PH条件的制约。因此，本实验中，我们采用了二文液相色谱结合相对和绝对定量同位素标记（isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ）蛋白质组学技术来研究云南白药治疗溃疡性结肠炎的作用机制。
1 材料与方法
1．1 仪器
纳升液相-离子阱-轨道阱质谱仪(Nano LC-LTQ-Orbitrap, Thermo，USA)，Thermo IEC 低温高速离心机(Thermo Co. MA. USA)；GENIE VORTEX-2 涡旋混合装置(Scientific Industries，Inc. N. Y. USA)；Thermo Savant SPD 2010 离心浓缩装置(Thermo Co. MA. USA)；Milli-Q Gradient A10 超纯水器(Millipore，Inc. USA)。
1．2 药品与试剂
云南白药粉末购于中国云南白药公司，通过研磨，乙醇超声提取，挥干复溶得到样品即云南白药提取溶液。在此之前，已经通过查阅资料得知云南白药的活性成分主要是皂苷一类物质，并通过高效液相色谱-高分辨率质谱（LC-MS）联用技术，比较皂苷标准品与样品云南白药提取溶液的保留时间、二级碎片，检验了样品有效成分。
色谱纯的甲醇、乙腈购自德国默克公司。试验用水均由Milli-Q Gradient A10 超纯水器制备。葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium，DSS）用于诱导小鼠结肠炎模型，购于美国MP公司。
1．3 实验动物
八周龄的雌性C57BL/6品系小鼠（20 g±2 g）获于南京农业大学实验动物中心。
1．4 动物实验方案
小鼠在实验动物中心于室温条件下（25±2 °C）分笼饲养，统一喂以标准鼠粮，对照组自由饮用饮用水，造模组和治疗组自由饮用DSS溶液。小鼠被随机等分为四组（n=10）：对照组1，正常供给饮用水，以灌胃方式注入饮用水（每只每天0.1 mL）；对照组2，正常供给饮用水，以灌胃方式注入云南白药（每只每天0.1 mL，剂量为160 mg/kg）；造模组，将饮用水换为4% DSS，以灌胃方式注入饮用水（每只每天0.1 mL）；治疗组，饮用水换为4% DSS，以灌胃方式注入云南白药（每只每天0.1 mL，剂量为160 mg/kg）。
下一篇：取代三苯胺类化合物的合成研究