蚂蟥生殖周期性类固醇激素变化的初步研究(2)
蚂蟥的雌雄性腺发育过程并不一致，性类固醇激素对动物性腺分化起着十分重要的作用，也是动物性腺分化的基础，近年来蚂蟥的研究多注重于药理和药效及生理方面的比较研究[3-5]，但国内尚没有关于蚂蟥生理周期性类固醇激素含量检测的报道。
性类固醇激素的检测中性激素的前处理方法是关键，需要根据目标的不同，通过改变提取、净化的条件，探索最合适的方法，尽可能的除去杂质，提高检测物质的纯净度。检测方法中包括：分光光度法，由于此方法的特异性差，灵敏度低，对于结构相近、相似的化合物无法分别等缺点，所以在研究初期有过使用，不过早已经被淘汰；免疫学检测法，灵敏高、特异性强、操作简单、价格低廉，能够实现对生物液体的小体积、大通量检测，并且逐渐成为有毒有害残留物检测的替代方法之一；高效液相色谱法(HPLC)，具有高效、分析速度快，分析范围广、操作简单等优点,所以一般用于化妆品、牛奶等性激素种类较少、成分不太复杂的检测;气象色谱(GC)，单一的GC随着技术的革新，逐步减少，相应方法的检测已经不能满足时代的要求，因此被气象色谱串联质谱（GC/MS）的方法取代; 气相色谱串联质谱法(GC/MS)，分离能力强、分离速度快、灵敏度高等优点，以及质谱拥有的结构鉴定的能力，使得此方法成为激素检测中主要的检测方法之一。但是此方法也有一些不足，例如：必须检测纯净的物质。因此前处理过程比较复杂，要求较高，需要衍生化，在一定程度上降低了灵敏度，并且分析速度和LC/MS相比较长。(五)高效液相色谱串联质谱法(LC/MS) [6-11]，基于高效液相质的优点，并且质谱有结构鉴定的能力，提高了检测的灵敏度和准确性，并且LC/MS和GC/MS相比，前处理过程中一般不需要衍生化，排除了气相色谱离子束的干扰。以电喷射和气压化学离子法进行离子软化，有效提高了检测限，并且使之耗时较短，使之成为常规临床检测的理想方法。李向军等利用高效液相色谱串联质谱法同时测定水产品中24种性激素；秦燕等利用液相色谱-质谱检测方法动物肌肉组织中甾类同化激素多组分残留。使用LC-MS的方法对多种水产品中性类固醇激素的检测实例，表明了液相色谱-质谱法已经是对水产品中性激素残留检测的一个主要手段,因此本实验采用LC/MS方法。
本实验研究综合了鱼类、黄鳝等多种动物内源激素的提取、检测方法，运用 UPLC-MS/MS对生殖周期中各月龄（1-11月龄）的蚂蟥进行4种激素含量的检测，旨在了解雌三醇、雌酮、睾丸酮、黄体酮在各各月龄的变化规律，为蚂蟥性类固醇激素的研究打下基础并且为蚂蟥人工养殖及有关标准的制订提供科学依据。
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