巧克力微杆菌中酯酶的克隆表达及性质研究(4)
酶的克隆与表达一般要经过以下几个步骤：
(1) 目的基因的获得：
可以通过人工合成的方法来合成已知核苷酸序列的DNA片段，也可以通过PCR（聚合酶链式反应）获得；
(2) 连接与转化：
将获得的目的基因片断扩增后与适当的载体连接，再导入适当的表达系统；
(3) 表达：
在适宜的培养条件下，使目的基因在表达系统中大量表达目的产物。
1.3 实验方案
根据巧克力微杆菌的测序结果，使用MEGA5.2和相关文献对有关酯酶的信息根据其一级结构进行整理归类；采用基因工程的手段对这些预测的酯酶进行克隆表达和特定底物酶活性测试，找到可以水解对硝基苯酚乙酸酯的酯酶，然后探索其最适反应温度，最适PH，并在最适条件下测活。