氯噻啉噬菌体展示酶免疫分析方法的研究(3)
为了克服P-ELISA较窄的线性范围的限制，我们结合噬菌体展示肽和CLEIA的优点，建立了具有高敏感性和更宽的线性范围的酶免疫分析。氯噻啉是一种广谱的新烟碱杀虫剂，对蜜蜂和其他授粉昆虫具有高毒性[22,23]并污染生态系统[24]。虽然基于仪器的检测方法，如高效液相色谱（HPLC）[25]和HPCL耦合到串联质谱（HPLC-MS/MS）[26-28]已成功用于氯噻啉的检测，但是仪器费用昂贵，大量样品检测时，耗时耗力。在以前的研究中，基于同源半抗原的ELISAs [29,30]和荧光偏振免疫测定法（FPIA）[31]，已应用于氯噻啉的检测，IC 50在58.2 ng mL-1至87.94 ng mL-1内。在此次研究中，我们从环7，环状8和线12噬菌体展示随机多肽库得到了吹冰种能够特异性识别氯噻啉单克隆抗体的多肽序列，并建立了检测氯噻啉的P-ELISA和P-CLEIA。比较两种方法的敏感性和线性范围，并先前报道的同源免疫分析法进行比较[29-31]。通过HPLC分析实际样品验证了P-ELISA和P-CLEIA的准确性。
本研究旨在建立多种快速灵敏的氯噻啉残留免疫分析方法，进行研究和比较分析，并且应用于环境和农业样品中氯噻啉残留检测。可以为氯噻啉残留检测提供更加丰富、更加便捷的检测手段和技术储备。
1.材料与方法
1.1材料
除特殊说明外，所有试剂均为分析纯。氯噻啉标准品（97.82%）来自南通江山农药化工股份有限公司，其他农药标准品均从由Ehrenstorfer（德国）购买。交叉反应所用标准品均购买于Dr Ehrenstorfer GmbH公司（德国）。脱脂奶粉购买于Bio-Rad，对碘苯酚（PIP）购买于ACROS公司。3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）、异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-乳糖苷（Xgal）、鲁米诺、吐温-20均购买自Sigma公司，HRP标记的鼠源抗M13单克隆抗体和大肠杆菌ER2738菌株购买自GE Healthcare公司，线十二肽库和环七库购买自NEB公司。单克隆抗体[35]和环八肽[36]来自之前的研究。
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