包埋法固定化大肠杆菌细胞的研究+文献综述(8)
3.2.2 海藻酸钠固定化细胞优化
（1）海藻酸钠浓度优化
取5份0.1 g干重的湿细胞，各加入1 ml生理盐水，混合制成菌悬浮液，放置。
配制5份不同浓度的海藻酸钠溶液，分别为：2%、2.5%、3%、3.5%、4%，将先前配制好的菌悬浮液加入5个不同浓度的海藻酸钠中，用针头制成直径约2 mm的大小均匀的固定化凝胶小珠，于0.1 M的CaCl2溶液浸泡0.5 h后，将凝胶小珠转移到0.01 M的CaCl2溶液中，放入4 ℃冰箱中硬化2 h。用生理盐水洗涤，过滤后分别测得5份固定化小球的湿重，取2份相同质重（0.2 g）的固定化小球进行反应。
在取好固定化小球的离心管中分别加入0.95 ml pH= 8的Tris-HCl缓冲液，以及0.05 ml的底物，放入T=30℃的摇床中反应约0.5 h，测活。
（2）氯化钙浓度优化
取0.5 g干重的湿细胞，加入5 ml生理盐水，混合制成菌悬浮液，加入25 ml 3%的海藻酸钠溶液，用针头制成不同浓度的CaCl2溶液中，分别为：0.1 M、0.2 M、0.3 M、0.4 M、0.5 M，形成大小均匀的固定化小球，浸泡0.5 h后，将固定化小球转移到0.01 M的CaCl2溶液中，放入4 ℃冰箱硬化2 h，用生理盐水洗涤。过滤后分别测得5份固定化小球的湿重，取2份相同质量（0.2 g）的固定化小球进行反应。
在取好固定化小球的管子中分别加入0.95ml pH=8的Tris-HCl缓冲液，以及0.05ml的底物，放入T=30℃的摇床中反应约0.5 h。
（3）硬化时间优化
取0.6 g干重的湿细胞，加入6 ml生理盐水，混合制成菌悬浮液，加入30 ml 3%的海藻酸钠溶液，用针头挤入CaCl2溶液中，形成大小均匀的固定化小球，浸泡0.5 h后，测得固定化小球的重量，平分为6份，转入0.01 M的CaCl2溶液中，在4 ℃冰箱中硬化不同的时间，分别为：0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h。取出后用生理盐水洗涤，过滤后分别测得6份固定化小球的湿重，取2份相同质重（0.2 g）的固定化小球，进行反应。
在取好固定化小球的管子中分别加入0.95 ml pH=8的Tris-HCl缓冲液，以及0.05 ml的底物，放入T=30℃的摇床中反应约0.5 h。
（4）缓冲溶液PH值优化
取0.6 g干重的湿细胞，加入6 ml生理盐水，混合制成菌悬浮液，加入30 ml 3%的海藻酸钠溶液，用针头挤入相同浓度的CaCl2溶液中，形成大小均匀的固定化小球，浸泡0.5 h后，转移至0.0 1 M的CaCl2溶液中，放入4 ℃冰箱硬化2 h，用生理盐水洗涤。
取出后取相同质量（0.2 g）的固定化小球于离心管中，加入0.95 mL不同pH值的Tris-HCl缓冲溶液，分别为：pH=6、6.5、7、7.5、8、8.5，以及0.05 ml的底物，放入T=30℃摇床中进行反应约0.5 h。
3.2.3固定化小球pH稳定性
取0.5 g干重的湿细胞，加入5 ml生理盐水，混合制成菌悬浮液，加入25 ml 3%的海藻酸钠溶液，用针头挤入0.1 M的CaCl2溶液中，形成大小均匀的固定化小球，硬化0.5 h后，转入0.01 M的CaCl2溶液中，放入4℃冰箱硬化2 h，用生理盐水洗涤。平分成12份于管内，加入不同pH的缓冲溶液，分别为：pH6.0、7.0、7.5、8.0、8.5约2 ml，放置12 h。
将缓冲溶液倒去，分别加入0.95 ml pH=8的Tris-HCl缓冲液，以及0.05 ml的底物，放入T=30 ℃摇床中进行反应约0.5 h。