基于外切酶反应和氧化石墨烯荧光检测碱性磷酸酶的活性(3)

2 结果与讨论
2.1 实验原理与探针设计
图1.基于GO和λ exo酶切检测CIP的原理示意图
实验原理如图1所示，实验中我们设计了两条DNA探针(P1，P2)，其中P1的5'末端标记有磷酸基团，P2的5'末端标记有荧光基团，两者退火杂交后形成一端荧光基团一端磷酸基团的双链DNA。无目标ALP(CIP)存在时，λ exo降解双链DNA中的末端磷酸化的P1，释放荧光基团标记的P2，加入GO吸附P2并猝灭其荧光，得到较弱的背景荧光。当CIP存在时，CIP水解5'末端的磷酸根，生成5'-羟基末端，发生去磷酸作用的双链DNA不能被λ exo有效酶切，加入GO由于GO与双链DNA结合力较小，仍可观察到较强的荧光信号。荧光信号的减小程度跟目标CIP的浓度成正比，通过检测荧光信号的变化可实现对目标CIP活性的检测。