诺如病毒中主要衣壳蛋白编码基因的克隆及序列分析(4)
1.2 pTrcHis载体
1.2.1 pTrcHis Vector 简介
pTrcHis 载体是由pBR322衍生表达而得到的，用于大肠杆菌中高效重组蛋白表达和纯化。高水平的表达可能使用色氨酸和乳糖杂合启动子（trc）和rrnB抗结束区域。Trc启动子由色氨酸启动子-35区域，乳糖启动子-10区域构成。pTrcHis 载体上也包含了复制lacIq 的基因，这种基因编码的蛋白阻遏乳糖启动子的表达。在大肠杆菌中无论是lacIq+ 还是lacIq-，这种插入物都可以高效抑制克隆基因转录。
进行蛋白表达时，大肠杆菌需要生长到对数生长期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，诱导表达。载体上的迷你顺反子结构能够增强插入基因的转录水平，从而高水平表达目的蛋白。DNA插入片段位于载体表达片段下游，在其上游有一个N-端融合表达多肽序列，该序列包含有ATG起始密码子，6xHis标签，T7噬菌体10号基因的翻译增强子，X press抗原表位，肠激酶酶切识别位点。pTrcHis 载体见图1-3。
1-3 pTrcHis B载体
Fig1-3 pTrcHis B Vector
注：图1-3上面是pTrcHis B的多克隆标记位点。限制性位点标记了实际切割位点。盒装核苷酸显示可变区，序列和功能测试证实了多克隆位