山羊胃肠道组织中T1R3基因的表达差异研究(2)
反刍动物的蛋白质营养研究一直是科学家们不懈努力的重点，其探索过程经历了几个重要的阶段，科学家先研究粗蛋白，然后是可消化蛋白，现在是出现了可代谢蛋白[1, 2]。不同的国家自20世纪70年代以来，涌现了各种新的评价体系，但最终的实质性内容都是反刍动物对蛋白质的需求就是瘤胃微生物的需求和反刍动物本身的需求[3]。蛋白质和氨基酸的营养需求其实是同样的，在反刍动物的生产性能中氨基酸是不可或缺的，因此，弄清氨基酸的需求及吸收问题成为我们当前研究的重点[4]。
为了提高动物生产者的经济效益，提高畜产品中的氨基酸含量及减少排泄物中的氮含量成为了最主要的任务，因此最大限度的提高动物体对氨基酸的吸收调控显得尤为重要[5]。胃肠道是氨基酸吸收的场所，但是现阶段，反刍动物可吸收氨基酸的测定方法都有或多或少的局限和不足[6]，比如，在反刍动物胃肠道内吸收的氨基酸会被微生物降解，而且需求量是动物机体的自身生理状态与外界环境共同作用的结果[6]。所以，我们所研究的问题就在于氨基酸的吸收调控机制到底是怎样的？
研究发现，动物体对氨基酸的吸收不是随意的，它有一定的识别判断机制，可以通过对自己采食的选择来控制自身氨基酸的平衡，但是这种识别系统不是单纯的觉识别，是精确且优于觉的氨基酸识别系统。因此动物的氨基酸识别机制是研究动物采食、消化、吸收机制的基础[7]。G蛋白偶联受体超基因家族中的T1R基因家族的基因在在甜、L型氨基酸识别中发挥着重要作用，哺乳动物T1R基因家族包括T1R1、T1R2和T1R3基因，从之前一些研究来看，这些基因表达的偏重部位是舌和口腔[8]，在哺乳动物上的研究表明，这些属于甜和鲜接收受体的基因蛋白[9]，在消化道中也是有表达[10]。根据基因敲除实验，结果发现T1R3基因和T1R基因家族的其他基因以差别性组合形式在觉及L型氨基酸识别方面起到用途。我们本实验的目的在于检测山羊胃肠道各段组织中T1R3基因是否都表达，若都表达的话，有怎样的表达差异性。同时分析出现表达差异的原因，在理论上，为反刍动物的氨基酸问题研究奠定基础，进一步在反刍动物的饲料营养配方和畜牧业养殖利益最大化给予支持。
1 实验过程、材料和方法
1.1实验过程
RNA提取—→RNA浓度测量—→反转录—→PCR定量—→数据分析—→结论总结—→论文书写修改。
1.2 实验材料
1.2.1实验样品来源
实验所用样品为徐淮山羊的胃肠道组织，包括四个胃（瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃），吹冰个肠（十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠）。每个组织采集三份，洗净后迅速放在液氮中，带回实验室在-80℃冰箱中保存。