市售酸奶保存期内乳酸菌数的动态研究(3)
2.1 准备
取27支洁净试管分别加入9 mL生理盐水，用棉塞塞住试管口，然后平均分成三组，每组分别用记号笔依次标注10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9。再取27套干净培养皿，9套一大组，分别标注上A、B、C，3套一小组。每大组中一个小组标明两个10-7，一个标明KB作为空白对照，剩余两小组用同样的方法标注10-8、10-9。用报纸分别将上述试管、培养皿以及移液枪枪头包好并和配置好的培养基一块放至高压灭菌锅内，在121℃下高压灭菌20分钟。
2.2 样品稀释
在超净工作台上用移液枪吸取酸奶样品1 mL，加入到10-1的试管中，然后用移液枪将试管内稀释液来回吸吹三次，至稀释液混合均匀，换取一支枪头，吸取10-1试管中的液体1 mL加入10-2的试管中，在吸吹三次，重复相同操作将A样品浓度稀释到10-9。使用同样的方法依次将B、C酸奶稀释到10-9[4]。稀释完毕后将酸奶样品放置4℃条件下保存。
2.3 平板制作及菌落培养
用移液枪吸取1 mL A酸奶10-7样品稀释液加入到10-7培养皿中，同时做两个平行平板，并用移液枪吸取1 mL生理盐水加入到KB培养皿中一个空白对照。将冷却至45℃左右的培养基注入上述三个培养皿中约15 mL，并且迅速轻轻的旋转几圈，使稀释液和培养基充分混合[5]。重复相同操作制作10-8、10-9两种稀释液的平板。依照制作A酸奶稀释液平板的方法制作B、C酸奶稀释液的平板。待培养基凝固后，将培养基移至37℃恒温培养箱中倒置培养48小时[6]。
2.4 菌落计数
通过肉眼观察，数出培养皿中乳酸菌的数量，计算同一稀释度下培养皿内菌落数量的平均数并记录[7]。
2.5 实验重复
本实验是研究酸奶样品在4℃、37℃、常温下和模拟酸奶购买过程中乳酸菌数量的动态变化，上述实验过程叙述了在4℃条件下保存的酸奶样品乳酸菌数量测定的过程。37℃条件下、常温条件下和模拟酸奶购买过程中乳酸菌数量的测定过程与上述过程存在差别，以下分别是常温条件下、37℃条件下和模拟酸奶购买过程中乳酸菌数量的测定过程：
①重复上述实验过程中各步骤测定常温下保存的酸奶乳酸菌数量，并将酸奶样品放置到常温条件下保存。
②依照上述方法制作37℃保存条件下酸奶10-7、10-8、10-9稀释度下的平板，将酸奶放回37℃条件储存，平板培养48小时后计数。并每隔两天做一次平板，由于在37℃条件下保存的酸奶中乳酸菌数量下降速度快，所以需要不断调高酸奶样品的稀释度，制作平板，直到平板中观察不到菌落。
③取4℃条件下保存的4月19号的酸奶制作10-7、10-8、10-9稀释度下的平板，制作完毕后将酸奶样品放至常温处5 h后再次制作10-7、10-8、10-9稀释度下的平板[8]，并将上述平板放置37℃下培养。
3. 结果
3.1 菌落观察结果
用肉眼观察菌落大小不一，白色且分布不均；在显微镜下观察菌落有杆状和球状。
3.2 菌落计数结果
3.2.1 在4℃条件下储存的酸奶中乳酸菌数的动态变化[9]
根据实验所测的4℃条件下酸奶中乳酸菌的数量制得下表：
表1 4℃下保存的酸奶乳酸菌数检测结果
天数 伊利风酸乳（原）乳酸菌数（cfu/mL）
第二天 5.2×1010
第四天 7.3.×1010
第吹冰天 5.8×1010
第八天 4.9×1010
第十天 3.1×1010
第十二天 1.8×1010
GB 4789.35—2010 1.0×106