植物内生真菌的分离纯化及其代谢产物的抗肿瘤活性检测(3)
1.4.4平板接种
在无菌操作台中进行，将镊子在火焰上灼烧30s后，夹取样本放入平板内，一个平板放入5片样片样本，均匀排布。
1.4.5室温培养
在室温（25℃）下培养3~7天，每日观察。
1.4.6纯化
观察培养基中组织块，一旦周围出现菌丝，立刻用接种针转移至新挑取到新的 PDA 培养基平板上,同时放入25℃恒温培养箱，继续培养。持续观察直到菌丝直径达到3cm，此时如果每个菌落的颜色、形态、长出时间没有大异，那么可推断是纯菌[10]，不是则重复以上操作，直到得到在菌落形态和颜色等一致的菌株。
1.5菌种保藏和发酵培养
将纯化好的培养基平板划成若干小块，取若干块分别放入含有液体石蜡和不含液体石蜡的已灭菌的菌种保藏管中，保藏于-80℃冰箱中。挑取带有菌种的培养基分别放入PDA液体培养基中，发酵20天。20天后过滤出发酵液备用。
1.6 MTT法检测内生真菌代谢产物的抗肿瘤活性
1.6.1试剂
F-12k培养液；胎牛血清FBS；10000U/ml氨苄青霉素；10mg/ml链霉素；0.25%胰酶；磷酸缓冲液PBS；二甲基亚砜DMSO；四甲基偶氮噻唑蓝MTT。
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