美拉德反应末端产物安全性的生物学评价(6)
猪骨素 45 60
L-半胱氨酸盐酸盐 0.75 3
L-谷氨酸 0.75 2
葡萄糖 1.125 1
木糖 0.375 0.5
乙基麦芽酚 0.75 1
呋喃酮 0.75 1
水 25.5 31
2.2.2 白鼠的灌胃与称重
随机选取白鼠5只作为一组并关在一个笼子中，共分成5组，按照以后灌胃的剂量，香精不同，分别标示为对照组（CK）,猪肉香精高剂量组（PH），猪肉香精低剂量组（PL），牛肉香精高剂量组（BH）,牛肉香精低剂量组(BL)。同时每只白鼠都用三硝基甘油稀释液在其身体上作不同标记。每三天灌胃一次，灌胃香精的浓度也会逐渐加大，每十天称重，最后一天取血，解剖。
灌胃前4小鼠禁食不禁水，而一般时间段则自由摄取水和食物。每隔一天换一次垫料和鼠笼，早晚两次观察实验老鼠，适当添加水和饲料。
第一次灌胃高剂量为0.5 ml，低剂量为0.25 ml；第二次灌胃高剂量为0.6 ml，低剂量为0.3 ml；第三次灌胃高剂量为0.7 ml,低剂量为0.35 ml，其余几次灌胃都按照第三次的浓度来。一共九次灌胃，最后两次灌胃前香精都各稀释过一倍。
一段时间后，白鼠灌胃时较为狂躁，尤其是高剂量香精灌胃时，但无明显死亡，萎靡状态。
每次白鼠称重后的体重都要加以记录，直到某只白鼠死亡为止。实验期间，白鼠体重持续增加。
2.2.3 小鼠脏体比的测定
实验结束后，解剖小鼠分别取出心和肝，称重并记录数据。
2.2.4 小鼠血生化的测定
眼眶取血，所取血样做好标记，送往奉贤中心医院血液检测中心进行化验。检测项目有：谷草转氨酶，谷丙转氨酶，碱性磷酸酶，总蛋白，白蛋白，球蛋白，白球比，总胆汁酸，乳酸脱氢酶，肌酸激酶，甘油三酯，胆固醇，高密度脂蛋白，低密度脂蛋白，载脂蛋白A，载脂蛋白B，脂蛋白，载脂蛋白E，游离脂肪酸。
同时，把白鼠的血按照不同的组别稀释后，在260 nm,280 nm,340 nm,450 nm下作荧光分析。将猪肉组与对照组、牛肉组与对照组在不同波峰下作对比，检查波峰的不同对于美拉德反应末端产物对白鼠血液的影响。
2.2.5 小鼠心、肝组织的生化测定
心，肝组织研磨后，分别用氧化物歧化酶（SOD）WST-1法，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）试剂盒法和丙二醛（MDA）试剂盒法测定。
（1） 氧化物歧化酶（SOD）WST-1法
准确称取组织重量，按照重量体积比1:9加入9倍体积生理盐水，剪碎组织，冰水浴制备匀浆，3000 r/min离心10分钟，取上清进行预实验。同时按照试剂盒上的药剂注入，分别测对照孔，对照空白孔，测定孔，测定空白孔，在450 nm下的数值。
（2） 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）试剂盒法
类似SOD的方法制备10%组织匀浆后，用生理盐水稀释至1 %。
分别用生理盐水将1%的匀浆稀释成1.0 %、0.5 %、0.4 %、0.3 %、0.25 %、0.2 %、0.1 %、0.05 %一系列不同浓度的组织匀浆，分别取其0.2 ml按组织的测定操作表检测，使其浓度在合适范围内作显色反应。待获得合适的稀释范围后，再按试剂盒内操作表，作酶促反应，显色反应。其中显色反应要做空白管，标准管，非酶管和酶管，每种都要平行，在412 nm处测各管OD值。
（3） 丙二醛（MDA）试剂盒法测定
类似SOD的方法制备10 %的组织匀浆后，按照试剂盒内操作表，分别作标准管，标准空白管，测定管，测定空白管，且每种管都需做平行。
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