车前草总黄酮提取工艺优化(3)
图3 不同乙醇浓度对车前草总黄酮提取率的影响
由实验结果图3可知，在料液比为1:25，中火微波2 min时，车前草总黄酮提取率先随乙醇浓度的增加而上升，达到最高值24.07 mg/g后，提取率逐渐下降。原因是乙醇浓度增加使亲脂性强的成分、醇溶性杂质、色素的溶出量增加，这些成分会和车前草中的黄酮类化合物竞争与乙醇结合，进而会使提取的黄酮类化合物的量减少[16]，所以选择75%的乙醇做提取剂为宜。
2.1.3料液比对车前草总黄酮提取率的影响
称取车前草5份，每份2 g，在室温下，分别以1:10、1:15、1:20、1:25、1:30 的75%的乙醇做料液比，微波提取两次，中火各2 min，合并提取液，加相应提取剂定容至合适的体积，510 nm测定吸光度。
图4 不同料液比对车前草总黄酮提取率的影响
实验结果图4表明，当料液比为1:10时，溶剂用量过小，提取率较低，当料液比为1:20时车前草总黄酮提取率最高为26.44 mg/g，继续增加料液比，总黄酮含量出现下降趋势。一般来说溶剂用量越大，提取率越大，但是过多的料液比会造成溶剂和能量的浪费，同时增大溶剂用量，很有可能把一些不易溶出的成分提取出来造成车前草中黄酮类化合物的提取率下降[17]。所以，选择料液比为1:20作为最佳料液比。
2.1.4微波时间对车前草总黄酮提取率的影响
称取车前草6份，每份2 g，在室温下，以料液比为1:20加入75%乙醇，样品分别中火微波提取0.5、1、2、3、4、5 min，提取两次合并提取液，加相应提取剂定容至50 mL，510 nm测定吸光度。
图5 不同微波时间对车前草总黄酮提取率的影响
实验结果图5表明，在一定时间范围内，车前草总黄酮提取率随提取时间的增加而升高，当微波提取3 min时，提取率达到最高为25.50 mg/g。在选择提取时间时既要考虑到有效物质是否已经充分溶出，也要注意过长时间的高温对提取物结构的影响，故选择微波时间为3 min。
2.1.5微波功率对车前草总黄酮提取率的影响
称取车前草5份，每份2 g，以料液比1:20加入75%乙醇，变换微波功率为低火、解冻、中火、中高火、高火，提取3 min，分别提取两次，合并提取液，加相应提取剂定容至50 mL，510 nm测定吸光度。
图6 不同微波功率对车前草总黄酮提取率的影响
实验结果图6表明，在一定微波功率范围内总黄酮含量随着功率增加而增大。其原因是因为随着功率的增大，分子的运动速度增加，增大了黄酮类物质向细胞外的溶出量。当微波功率为中火时，车前草总黄酮提取率达到最高为21.28 mg/g，当微波功率为中高火或高火时总黄酮含量反而下降，可能是由于温度较高时可溶性蛋白质溶出发生变性，影响了细胞的破裂阻碍了车前草总黄酮的溶出，从而降低了总黄酮的提取率[18]。考虑到为保证总黄酮充分提取，同时为了防止过高温度引起的物质的分解，所以选择微波功率为中火。
2.2正交实验
由于影响车前草总黄酮提取率的溶剂浓度、料液比、微波时间、微波功率四个因素之间能够相互影响，因此本文在单因素实验的结果基础上，设计4因素3水平的正交实验，确定车前草总黄酮提取的最佳工艺条件。正交实验的方案与结果分别见表1、表2。
表1 正交实验因素水平表
水平 因素
A溶剂浓度 B料液比 C 微波时间 D微波功率
1 60% 1:15 2 解冻
2 75% 1:20 3 中火
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