金霉素的水生生物毒性评价(4)
微囊藻毒素对蜗牛、鸭、水鸟、狗[26-28]的毒性有相关报道；Li等人[29]发现微囊藻提取物对Wistar大鼠肝脏、肾脏和睾丸组织中促癌基因表达有影响；zhao等人[30]发现了微囊藻毒素对兔心脏和肝脏的毒性作用并对其毒性机理进行了研究。而最近，也有文章研究和分析了作为食物链顶端的人类通过食物链的生物富集作用所受到的微囊藻毒素的威胁[31]。
除了对于动物的研究，微囊藻毒素对于各类植物的影响作用也受到了科学家们的关注，如chen等人[32]研究在受到微囊藻毒素污染的水源的灌溉作用下，苹果树内微囊藻毒素的生物富集状况以及微囊藻毒素对其所造成的氧化应激作用。而Máthé等人[33]发现MC-LR可以通过改变芦苇幼苗的微观结构而引起植株异常根部的生成。Mcelhiney等[34]发现MC-LR的存在可对茄属植物(Solanum)的生长和豆类植物(Phaseolus vulgaris)根的发育产生不良影响。
Singh等[35]研究了微囊藻毒素对藻类、微生物和真菌生长的效应，发现在初始50 mg/L的MC可完全抑制灰色念珠藻和鱼腥藻的生长并使藻细胞溶解，观察到了微囊藻毒素对二氧化碳的吸收和光合作用的不良影响，同时推断出铜绿微囊藻通过微囊藻毒素的杀藻作用是保持其在自然条件下保持为优势藻种的重要原因。
到目前为止，受到微囊藻毒素相关毒性作用研究的生物种类与早期相比有明显的增多。从水生生物到陆生生物，从藻类到哺乳动物，各种生物受微囊藻毒素毒性作用的研究既为微囊藻毒素对于人类的毒性作用的研究提供了一定的参考，同时也充分说明微囊藻毒素对于自然环境以及各种生物具有严重的危害。
但是，就四环素类抗生素对蓝藻的水生生物毒性影响的研究来说，这方面的研究仍然很空白。特别是该类抗生素与蓝藻在水体存时，抗生素对蓝藻释放微囊藻毒素的影响，虽然蓝藻细胞中含有微囊藻毒素，但在正常情况下很少释放到水体中，只有在一定的环境胁迫下才会释放出来，对水质及环境安全产生一定的威胁。由目前关于研究微囊藻毒素对各类动植物的毒性作用来看，我们必须要考虑到在自然水体中抗生素是否会影响蓝藻释放微囊藻毒素，因此探索四环素类抗生素对蓝藻产生的毒性效应及其致毒机理，并检测其释放藻毒素产率及种类的变化是很有环境保护意义的。
2 研究方案与方法
2.1 实验铜绿微囊藻的培养
实验所用铜绿微囊藻藻类种源是通过中国武汉科学院水生生物研究所购买获得，该藻类的培养过程有仪器灭菌、烘干，培养液制备，藻液接种和培养四个步骤。
（1） 器具灭菌、烘干
采用立式压力蒸汽锅消毒灭菌，该法是利用高温杀死微生物的方法。灭菌之后的器具要放入烘箱内进行烘干以供后续试实验使用。实验所用的器具如烧瓶、烧杯、量筒等在使用前均需要灭菌、烘干。将清洗干净的器具用立式压力蒸汽锅在121°C，0.1兆帕下灭菌30分钟后待立式压力蒸汽锅的压力恢复至0兆帕时，将灭菌后的仪器放入电热鼓风干燥箱在70°C下干燥2小时等到用时再取出。
注意不能耐高温的器具，如塑料和橡胶制品等不能用高温高压灭菌锅灭菌及用烘箱烘干。此类不耐高温的器具可用75%的乙醇或次氯酸钠溶液浸泡半天以供实验使用。
（2） 培养液的制备
培养液（液体培养基）是在纯净水中加入各种营养物质配制而成。本实验以铜绿微囊藻为研究对象，培养基为BG11培养基，培养基成分(配制1L培养液)如下表1：
表1 BG11培养基的配制成分
药品名称 添加量
NaNO3 1.5 g/L