金霉素的水生生物毒性评价(5)
K2HPO4 0.04 g/L
MgSO4•7H2O 0.075 g/L
CaCl2•2H2O 0.036 g/L
Citric acid(柠檬酸) 0.006 g/L
Ferric ammonium cirrate(柠檬酸铵盐) 0.006 g/L
EDTA Na2 0.005 g/L
Na2CO3 0.04 g/L
A5 (Trace mental solution) 1mL/L
表2 A5的配制成分
药品名称 添加量
H3BO3 2.86 g/L
MnCl2•4H2O 1.86 g/L
ZnSO4•7H2O 0.22 g/L
Na2MO4•7H2O 0.39 g/L
注意培养液配制完要放入立式压力蒸汽锅内在121 °C，0.1兆帕条件下灭菌30分钟。
（3） 藻液接种
培养液配制好后要先进行灭菌后在进行接种培养。接种的目的是把选为藻种的藻液接入新配制好的培养液中。
将藻种移入灭菌烘干后的三角锥形瓶中，接种的藻液与灭菌培养液的比例由原始藻液的吸光度及染毒后接种藻液的定容总体积而定，本实验染毒后接种藻液的总体积在20~50ml左右。
藻种的质量一般要求选取无敌害生物污染、生活力强、生长旺盛的藻种培养。藻液的外观应颜色正常、无大量沉淀和无明显附壁现象。
（4） 藻液培养
培养环境为SPX-GB-150光照培养箱。培养方法是用500ml三角瓶，装200～400ml培养液，接种藻种使成淡绿色。四层纱布封口以防污染，温度为25±0.5 °C，光照在3000～40001x连续静止培养。每天摇动1～2次，经几天培养后藻液颜色变深。
2.2 实验方案
实验开始时将铜绿微囊藻接种于50ml三角锥形瓶中，总体积为20~50ml，每批实验染毒藻液的总体积要一致。初始接种藻细胞浓度范围为0.04~0.07的吸光度。接种后对其进行一定浓度梯度的金霉素溶液处理，每个浓度设置3个平行，并设置一组未经金霉素溶液处理的接种藻液。金霉素溶液处理后的藻液在培养箱内培养48~72h后，用0.45µm滤膜过滤出细胞外微囊藻毒素用酶联免疫法测定起微囊藻毒素含量，从而得出金霉素溶液对铜绿微囊藻藻毒素释放的影响。
对于确定一定浓度梯度的金霉素溶液，正式实验前先进行预实验，以确定适合的浓度范围及浓度梯度。预实验时由于金霉素溶液对藻细胞有怎样影响并不确定，需要设定较大的浓度梯度，但主要实验步骤与正式实验相同。
3 实验部分
3.1 实验材料与试剂
（1） 实验材料：FACHB-905铜绿微囊藻株（中国科学院水生生物研究所，武汉，中国）、0.45µm针头过滤器（郭店桃园医疗化工仪器厂，海宁市）、容量瓶、注射器、量筒、烧杯、电子天平（FA1004，海康电子仪器厂，上海）、移液枪（20~200µm，DU008，DragonLab）、移液枪（200~1000µl，DX89019，DragonLab）、排枪（KA0062004，DragonLab）、紫外－可见光分光光度仪（TU-1810，普析通用仪器有限责任公司，北京）、光照培养箱（SPX-GB-150，博泰实验设备有限公司，中国）、立式压力蒸汽锅（博讯实业有限公司，上海）、恒温水浴锅（HB-03，莱伯泰科仪器有限公司，北京）、超声波仪（SY-360，宁商超声仪器有限公司，上海）、电热鼓风干燥箱（恒一科学仪器有限公司，上海）、酶标仪（BioTek，USA）、冰箱（BCD-108S，康佳电器有限公司，安徽）、超声波细胞粉碎机（新芝生物科技股份有限公司，JY 96-IIN，宁波）
（2）实验试剂：○1微囊藻毒素酶联免疫快速检测试剂盒（生工生物工程股份有限公司，上海）；○2金霉素（Dr.Ehrenstorfer，Germany）；○3实验药品（分析纯，展云化工有限公司，上海）：NaNO3、K2HPO4 MgSO4•7H2O、CaCl2•2H2O、Citric acid(柠檬酸)、Ferric ammonium cirrate(柠檬酸铵盐)、EDTA Na2、Na2CO3、A5 (Trace mental solution)：H3BO3、MnCl2•4H2O、ZnSO4•7H2O、Na2MO4•7H2O、Co(NO3) 2•7H2O、CuSO4•5H2O ；○4无水乙醇（分析纯，展云化工有限公司，上海）；○5 纯净水（哇哈哈集团，杭州，中国）