HPLC使用键合型多糖手性柱拆分对映体(3)
色谱柱：
Chiralpak ID-3
规格：150*4.6mm 粒径：3μm；
流动相：甲醇:水=95:5/90:10/85:15/82.5:17.5/80:20（V/V）
流速：0.4ml/min，0.5ml/min，0.6ml/min, 0.7ml/min，0.8ml/min;
UV检测波长：282nm；
进样量：5μL；
柱温为：15℃，20℃,25℃，30℃，35℃，
控温精度： 0.5℃。
2.3.3 中间体C色谱条件
色谱柱：Chiralcel OD
规格：150*4.6mm 粒径：5μm；
流动相：正己烷：异丙醇=7:3 ;
正辛烷：异丙醇=98:2；
正庚烷：异丙醇=98:2
三乙胺浓度：0.3%
流速：分别为0.7 ml/min；0.5 ml/min；0.5 ml/min
UV检测波长：210nm；
进样量：20μL；
柱温为：17.6摄氏度（室温），
控温精度： 2℃。
3 HPLC拆分苯丙氨醇
3.1 实验步骤
3.1.1 色谱仪的准备工作
本实验采用实验仪器（1）由安捷伦科技有限公司出产的Agilent technologies 1260 infinity 型液相色谱仪完成。实验时先打开工作站电脑，启动色谱工作站程序，再依次打开色谱仪各个模块，最后使各个模块与工作站相连。进行一些基本设置，设置波长，流动相比例，检测通道，设置测样方法，设置测样序列等。待到基线走稳后 ，可以开始进行样品的拆分工作。
3.1.2 实验试液的配制
（1）流动相的配制
用量筒量取适量的甲醇一份和水两份，用砂芯漏斗进行过滤，然后取一份水加入一定比例的三乙胺，调节三乙胺浓度至1%，摇匀静置后备用。由于实验仪器自动混合样品并带有脱气机，故在实验时，通过调节已配置流动相与纯试剂的比例即可。
（2）样品的配制
称取少量的样品，称量后溶于流动相溶液中，并定容。超声5min之后静置，放入冰箱备用。
3.2 实验内容
3.2.1 使用不同的流动相配比拆分样品
本组实验采用不同流动相配比为甲醇:水=70:30/65:35/60:40/55:45。设置相应的流动相配比，设置泵的流速为0.6min/ml，三乙胺含量为0.3%，波长为258nm，温度为40℃。每组流动相重复两次，测完后需手动调节流动相比例，再重复测样。
3.2.2 在不同的三乙胺浓度下拆分样品
本组实验采用不同的三乙胺浓度为0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%，设置泵的流速为0.6min/ml，流动相比例为甲醇：水=60:40，调节相应三乙胺浓度，检测波长为258nm，温度为40℃。同一三乙胺浓度下重复两次，测完后需手动调节各储液瓶中的取液比例，使之达到所需的三乙胺浓度，再重复测样。
3.2.3 在不同流速下拆分样品
本组实验所测流速分别为0.4min/ml，0.5min/ml，0.6min/ml。设置检测波长为258nm，流动相比例为甲醇：水=60:40，设置相应流速，三乙胺浓度为0.3%，温度为40℃。每组流速重复两次，测完后需手动改变流速，再重复测样。
3.2.4 在不同温度下拆分样品
本组实验所测试温度分别为25℃，30℃， 35℃， 40℃，45℃，流动相为甲醇：水=60:40，设置泵的流速为0.6min/ml，三乙胺含量为0.3%，波长为258nm，设置相应温度。每组温度重复两次，测完后需手动改变温度，再重复测样。
4 HPLC拆分奈必洛尔
4.1 实验步骤
4.1.1 色谱仪的准备工作
本实验是在实验仪器（2）美国戴安公司的DIONEX U-3000型液相色谱仪上完成的。使用时先打开电脑，启动色谱工作站程序，然后依次打开各个色谱仪模块，最后使各个模块与工作站相连。进行一些基本设置，设置波长，流动相通道以及比例，柱温箱温度，设置模块方法，设置测样序列等。等到基线走稳后 ，开始进行样品的拆分工作。
4.1.2 实验试液的配制