HPLC使用键合型多糖手性柱拆分对映体(6)
25 25.973 29.027 3390 2635 1.52 2.770 3.213 1.160
30 25.080 27.959 4367 3494 1.69 2.609 3.023 1.158
35 23.749 26.310 4962 3501 1.64 2.412 2.780 1.153
40 22.897 25.264 5655 4398 1.72 2.328 2.672 1.148
45 21.859 24.003 6485 5478 1.80 2.205 2.519 1.143
分析实验数据，根据lnk1、lnk2、lnα与1/T作图，数据表如下：
表5.5 lnK1、lnK2与1/T数据表
温度(℃) 25 30 35 40 45
1/T 0.00335 0.00330 0.00325 0.00319 0.00314
k1 2.808 2.677 2.482 2.357 2.205
k2 3.256 3.100 2.858 2.704 2.519
Lnk1 1.033 0.985 0.910 0.958 0.791
Lnk2 1.181 1.131 1.050 0.995 0.924
根据上表数据作图如下：
图5.1 lnK1、lnK2与1/T之间线性关系图
lnα与1/T的数据表如下：
表5.6 lnα与1/T数据表
温度(℃) 25 30 35 40 45
α 1.159 1.157 1.151 1.147 1.142
lnα 0.148 0.147 0.142 0.138 0.133
1/T 0.00335 0.00330 0.00325 0.00319 0.00314
根据上表中数据作图如下：
图5.2 lnα与1/T之间线性关系图
小结：
在流速为0.60min/ml，流动相为甲醇：水=4:6时，在加入0.3%三乙胺的条件下，分别在温度为25℃,30℃,35℃,40℃和45℃条件下进行拆分，样品的分离度随着温度的升高而增大，但是在这些温度条件下，样品均得到完全分离。综合考虑实验温度对柱压的影响及对实验器材的保护，选40℃为最佳实验条件。
根据lnk1、lnk2与1/T图中R2均大于0.96表明线性较好。根据lnα与1/T图得到线性拟合方程y = 0.0736x - 0.0979，可求得相关参数△△H0=-0.612KJ/mol，△△S0=-0.814KJ/mol。△△H0和△△S0均为负，说明手性拆分为焓驱动[1]。后出峰的异构体较先出峰的异构体与固定相存在更强的相互作用。温度升高分离因子下降，实验情况与其相符。△△H0的绝对值为0.146Kcal/mol，手性识别不仅因于立体阻碍还存在很弱的弱氢键等作用力。
5.2 小结
通过以上的实验结果，可以得出苯丙氨醇的拆分情况，结论总结如下：
经过大量的实验条件摸索，反复实验对比，最终发现在40℃的温度下，流动相为甲醇与水4：6，流速为0.60min/ml，在加入0.3%三乙胺的条件下，样品能得到完全分离，且此实验条件对实验仪器及色谱柱较为友好。