HPLC使用键合型多糖手性柱拆分对映体(9)
分析实验数据，根据lnk1、lnk2、lnα与1/T作图，数据表如下：
表6.5 lnK1、lnK2与1/T数据表
温度(℃) 15 20 25 30 35
1/T 0.00347 0.00341 0.00335 0.00329 0.00325
k1 1.697 1.512 1.364 1.094 1.239
k2 2.331 2.089 1.883 1.495 1.710
lnk1 0.527 0.413 0.311 0.090 0.214
lnk2 0.846 0.737 0.633 0.402 0.537
根据上表数据作图，如下：
图6.1 lnK1、lnK2与1/T之间线性关系图
lnα与1/T的数据表如下：
表6.6 lnα与1/T数据表
温度(℃) 15 20 25 30 35
α 1.373 1.378 1.376 1.360 1.375
lnα 0.314 0.316 0.318 0.310 0.315
1/T 0.00347 0.00341 0.00335 0.00329 0.00325
分析实验数据，根据lnα与1/T作图：
图6.2 20-35℃lnα与1/T之间线性关系图
图6.3 lnα与1/T散点图
小结：
在流速为0.70min/ml，流动相为甲醇：水为82.5：17.5时，在加入0.3%三乙胺的条件下，分别温度在15℃，20℃,25℃,30℃和35℃时，样品的分离度随着温度的升高而缓慢增长，在35℃时，样品的分离度达到最大。故选择35℃为最佳分离温度。
根据lnk1、lnk2与1/T图中R2均大于0.97表明线性较好。分析lnα与1/T的图，找到相关线性关系。20摄氏度时线性发生转折，在相关文献中[1]可找到所致原因。根据所做图谱可得线性拟合方程y = 0.0341x + 0.2075。可求得相关参数△△H0=-0.284KJ/mol，△△S0=1.725KJ/mol。前者为负而后者为正，说明熵驱动和焓驱动对手性识别均有贡献。而图中得出应在20摄氏度时洗脱机理发生改变。△△H0的绝对值为0.068Kcel/mol，小于0.1，则可以得到手性识别仅仅归于立体阻碍，没有其他作用力。
6.2 小结
通过以上的实验结果，可以得出奈必洛尔的拆分情况，结论如下：
在35℃下，流动相为甲醇与水=82.5：17.5时，流速为0.70min/ml，在加入0.3%三乙胺的条件下，样品可以得到完全分离，且所选条件对实验仪器及所用色谱柱手性柱友好。
最优条件下拆分谱图如下：
图6.3 奈必洛尔在最优条件下拆分效果
7 药物中间体（C）拆分尝试及各流动相对比
7.1色谱仪的准备工作
打开电脑，双击Windows桌面上的FL9500色谱工作站图标，即启动本系统。之后选择与之相连的仪器信号通路。同时打开FL2200型UV检测器和FL2200型高效液相色谱泵，设置检测波长为210nm，流速为0.7min/ml。等到基线走稳后，可开始进行样品的检测工作。
7.2正己烷与异丙醇体系下拆分尝试
7.2.1实验试液的配制
（1）流动相的配制
用量筒量取不同比例的正己烷和异丙醇，用砂芯漏斗进行过滤，然后加入一定比例的三乙胺，摇匀静置后备用。
（2）样品的配制
称取少量的样品C，溶于流动相溶液中，超声5min，之后静置，备用。