HPLC使用键合型多糖手性柱拆分对映体(4)
（1）流动相的配制
用量筒量取适量的甲醇一份和水两份，用砂芯漏斗进行过滤，然后取一份水加入一定比例的三乙胺，调节三乙胺浓度至1%，摇匀静置后备用。由于实验仪器自动混合样品并带有脱气机，故在实验时，通过调节已配置流动相与纯试剂的比例即可。
（2）样品的配制
称取少量的样品，称量后溶于流动相溶液中，并定容。超声5min之后静置，放入冰箱备用。
4.2 实验内容
4.2.1 使用不同的流动相配比拆分样品
本组实验所测流动相配比分别为甲醇:水=95:5/90:10/85:15/82.5:17.5/80:20。调节相应的流动相配比，设置泵的流速为0.7min/ml，三乙胺含量为0.3%，检测波长为282nm，设置温度为22.5℃。每组流动相重复两次，测完后需手动调节流动相比例，再重复测样。
4.2.2 在不同的三乙胺浓度下拆分样品
本组实验所测三乙胺浓度分别为0.1%，0.2%，0.3%，0.4%。设置泵的流速为0.7min/ml，流动相配比为甲醇：水=82.5:17.5，调节三乙胺至相应浓度，设置检测波长为282nm，设置温度为22.5℃。每组流动相重复两次，测完后需手动调节各储液瓶中的取液比例，使之达到所需的三乙胺浓度，再重复测样。
4.2.3 在不同流速下拆分样品
本组实验所测流速分别为0.4min/ml，0.5min/ml，0.6min/ml，0.7min/ml，0.8min/ml。设置泵的流速，流动相比例为甲醇：水=82.5:17.5，检测波长为282nm，温度为22.5℃。每组流速重复两次，测完后需手动改变流速，再重复测样。
4.2.4 在不同温度下拆分样品
本组实验所测试不同温度为15℃， 20℃， 25℃，30℃，35℃，设置相应流动相比例，三乙胺浓度为0.3%，设置泵的流速为0.7min/ml，设置检测波长为282nm，设置温度。每组温度重复两次，测完后需手动改变温度，再重复测样。
5 苯丙氨醇的结果与讨论
5.1 苯丙氨醇分离条件对比
5.1.1 不同的流动相配比对其拆分影响
在控温40℃下，流速为0.60min/ml，不同流动相配比（甲醇/水），在加入0.3%三乙胺的条件下，苯丙氨醇的拆分情况。
表5.1 40℃下，苯丙氨醇在不同流动相配比下的实验数据
甲醇：水 保留时间1（min） 保留时间2（min） 理论塔板数1 理论塔板数2 分离度 k1 k2 α
30:70 23.601 27.783 6357 4363 2.91 3.938 4.814 1.222
35:65 18.041 20.487 7112 5029 2.45 2.785 3.519 1.263
40:60 15.074 16.578 8136 6171 1.99 2.236 3.559 1.144
45:55 12.314 13.297 8376 6572 1.50 1.718 1.935 1.126
小结：
在40℃的温度下，流速为0.60min/ml，在加入0.3%三乙胺的条件下，样品的分离度，随着流动相中甲醇含量的增大而减小。在甲醇：水=4:6的情况下，样品得到完全分离，且分离情况较好，分离度达到1.99。
5.1.2 不同的三乙胺浓度对其拆分影响
在温度为40℃情况下，流速为0.60min/ml，流动相为甲醇：水为4：6时，在加入不同量三乙胺的条件下，苯丙氨醇的拆分情况。