不同提取方法对茶树花多糖性质的影响研究(3)
1．1．3 酶解提取法
分别称取磨碎烘干的茶花粉10 g，按表1的条件加入纤文素酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶，酶解后在95℃下灭酶10 min，过滤，滤渣继续用水提取，提取条件同热水浸提法。
表1 不同的酶制剂作用的条件
纤文素酶 菠萝蛋白酶 中性蛋白酶
缓冲液pH 4.8 7.1 6.6
温度（℃） 55 55 40
加酶量（%） 0.5 0.5 0.5
1．1．4 超声波辅助提取法
磨碎茶花粉烘干称取10 g，料液比1 : 25，超声功率540 W，超声时间12 min，，再按热水浸提条件继续提取，重复操作2次，得到粗多糖。
1．1．5 茶树花多糖得率
茶树花多糖得率按以下公式计算：
粗多糖得率=粗多糖质量/茶树花粉的质量×100%
1．2 茶树花粗多糖理化性质的测定
1．2．1 总糖含量的测定
多糖样品中的总糖含量的测定采用硫酸-苯酚法[15]。
准确配置100 μg/mL的葡萄糖标准溶液，精密吸取 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，加入浓硫酸 2.5mL，摇匀，490 nm 处的测定吸光度值。
样品中的总糖含量测定：将样品配置成适当浓度（约100 μg/mL）取1mL样品，按上述步骤操作，在490 nm 处测其吸光值，并根据标准曲线计算其总糖含量。
1．2．2 蛋白质含量的测定
多糖样品中的蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法[16]。
所用试剂：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL，90％的乙醇，加入100mL，85％磷酸溶液，定容至1000mL，得考马斯亮蓝工作液，中性滤纸过滤，棕色瓶保存。得到100 μg/mL牛血清白蛋白（BSA）标准溶液。
标准曲线的绘制：取上述BSA标准溶液 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL至于6个试管中，去离子水补至1.0mL，涡旋均匀后加入考马斯亮蓝工作液5.0mL，混匀静置5min后，595nm测吸光值，以BSA浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
测定多糖样品中的蛋白质含量：将样品配置成适当浓度（约5mg/mL）,取1mL样品，按上述步骤测定吸光值，根据标准曲线计算蛋白质含量。
1．2．3 多酚含量测定
测定多糖样品中的多酚含量采用福林酚法[19]。
标准曲线的绘制：精密称取10mg绿原酸，定容至100mL，得0.1mg/mL的绿原酸，取上述绿原酸溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL至于5个试管中，去离子水补至1.0mL，混匀。从上述五个试管中各取200μL样品，加入10％的福林酚1mL，在37℃反应5min，再加入10％Na2CO3溶液2mL，在37℃反应1h后于747nm测吸光值。
多糖样品中多酚含量的测定：将样品配成适宜浓度，取200μL样品，按上述步骤测定吸光值，按照标准曲线计算多酚含量。