火腿烤鸭中水溶性提取物分离技术的研究(4)
层析技术的优点具体有：分离效率高、分析速度快、具有极高的灵敏度、应用范围广。
1.3.3 凝胶层析
（1）凝胶层析的概念：
凝胶层析（gel filtration）又称为凝胶排阻层析（gel exclusion chromatography）、分子筛层析（molecular sieve chromatography）、凝胶过滤（gel filtration）、凝胶渗透层析（gel permeation chromatography）等[9]。
（2）凝胶层析的原理：
凝胶层析是依据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。
图1.2 凝胶层析技术原理
（3）特点：
凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件较温和，可在相当广的温度范围内进行，不需要有机溶剂，对于高分子物质有很好的分离效果。
1.4体外抗氧化活性
1.4.1 总还原力法
用还原三价铁离子法[10]测定样品的还原能力。于700 nm 处测吸光度，吸光度大表明其还原能力强。
1.4.2 羟自由基清除能力的测定
OH•是一个氧化能力很强的自由基，可以发生电子转移，夺取氧原子和经基化等反应，可以使糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等发生氧化，遭受损伤与破坏，与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬作用有关。因此，近年来, 在基础医学、临床医学、预防医学、药学等领域，对开展了广泛的研究工作。此外，在己知的氧化剂中, OH•的能力仅次于, 是一种非选择性的氧化剂，能很容易地氧化各种有机物和无机物，氧化效率高，反应速度快。因此，在大气污染化学和废水深度化处理等领域，也对OH•进行了深人的研究。由于OH• 的反应活性大、寿命短、存在浓度低，所以在有关OH•的研究中，其分析测试方法显得特别重要。本文对有关OH•的分析测试方法进行综述和评价[11]。
1.4.3 DPPH 自由基( DPPH•) 法
研究表明，在有机体稳态平衡失调的情况下，体内过剩自由基和活性氧的产生、反应与许多疾病的发生、发展及有机体的衰老过程密切相关。自由基活性氧会破坏生物大分子(如蛋白质、酶和DNA 等) ，引起DNA突变或断裂，功能蛋白和膜结构的破坏。自由基损伤机体，是加速人体老化的重要诱因。补充抗氧化营养素有助于减轻氧化损伤。因此，寻找能有效清除自由基活性的抗氧化食物和中草药对于保护人类健康具有重要意义。
2,2-二苯基-1-苦肼基自由基（2,2-dipheny1-1-picrylhydrazy,DPPH）分析法是一种筛选自由基清除剂的简便方法, 实验原理是依据DPPH自由基具有单电子而在517nm 处有强吸收(呈深紫色)的特性, 用分光光度法对自由基清除程度进行定量分析。本研究采用DPPH自由基分析法测定火腿、烤鸭水溶性提取物清除自由基作用活性, 用以评价实验样品的抗氧化能力[12]。
1.4.4 ABTS自由基法
ABTS法是使用最普遍的测量和表征抗氧化剂抗氧化能力的比色法，该法最初由Marklund提出，用含有蛋白质的血红素过氧化物酶与ABTS反应生成ABTS•+，用于测定组织样品中血红蛋白的含量。后来，Miller等对该法进行改进，用于测定生物样品的抗氧化活性，然后广泛应用于食品和天然水溶性酚类物质抗氧化活性的测定。
Miller等用铁肌红蛋白自由基(ferryl myoglobin)（由高铁肌红蛋( metamyoglobin) 和H2O2反应生成）与ABTS反应生成ABTS•+，抗氧化剂在ABTS•+生成前加入，但抗氧化剂也能和铁肌红蛋白自由基反应，测得的TEAC值偏高，抗氧化能力被高估。美国Randox Laboratories公司根据Miller等的方法生产出ABTS试剂盒，也叫做TEAC法。然而，此法使用的工作试剂贮存期短( 4 ℃，48 h)，购买的试剂盒贵，测定血浆等生物试样会造成假阳性结果。而且，血色素和过氧化物产生另外的颜色，在分析中易造成负干扰[13]。