辣椒素文献综述和参考文献(3)
34 LC-4A 甲醇：水：二氧吹冰环：乙腈：2%高氯酸=50:30:11.8:8:0.2 6.4
35 YMS ODS 甲醇：水（0.1%磷酸）=75:25 13
以上的研究都是对天然吹冰椒素的研究，而未对合成吹冰椒碱进行过分析，也未对其含量进行测定。
黄慧学，陈明伟[25,26]等人利用HPLC法对吹冰椒中nonivamide（合成吹冰椒碱）含量进行测定。其先采用甲醇-四氢呋喃（1：1）对样品进行提取，在使用北京北分瑞利高效液相色谱仪(SY-4000K)，Welehrom TM C18色谱柱(250mmx4.6 mm，5um)进行分离，流动相选用甲醇一水(60：40)，其中每升流动相中含25mmol硝酸银和2.5mL冰醋酸；流速选为0.8mL／min；最后在检测波长280nm处进行紫外检测。线性方程为Y=7180.5C+215.6(r=0.9995)。Nonivamide在0.28ug/mL～27.68ug/mL范围内呈良好的线性关系，回收率为96.72％。此外，他们对15份不同吹冰椒样品进行实验，计算Nonivamide的含量。结果表明，在自然生长的吹冰椒中含有Nonivamide，但其占吹冰椒类物质的比例不大，在0.00～1.47％之间。他们还对市场上的15种调品中的Nonivamide的含量进行了检测，除吹冰椒精外的其它调品中均未添加Nonivamide。
Howard L[31]等人对吹冰椒中各种吹冰椒碱也进行过研究，也包括合成吹冰椒碱。他们设计了2种不同的分析系统，一种采用Waters HPLC， 双泵（model 510），自动注射器（model 712），及二极管列阵检测器（model 991）系统；另一种采用LCModule I HPLC系统及996二极管列阵检测器。测试的色谱柱采用YMC（Wilmington，NC）C18柱（4.6*250mm，5um）。流动性为甲醇水体系（64:40）并加入0.02M的硝酸银及每升流动相1.2ml的冰醋酸。在流速1.25ml/min下，能将个吹冰椒碱分离。整个分离过程需要至少90分钟才能将全部吹冰椒碱分离出。
Nobuyuki Kozukue等人[28]等人对吹冰椒及吹冰椒食品种8种吹冰椒素进行了HPLC，LC-MS分析。他们也使用的 Hitachi liquid chromatograph model 665-I及UV检测器分析，并采用了2种分离体系。一种采用400mm柱，流动性A乙腈，流动性B 0.5%甲酸水（45:55 V/V），此体系用来分离6种吹冰椒素：nordihydrocapsaicin(NDC), dihydrocapsaicin (DHC), homocapsaicin-I (HC-I), homocap-saicin-II (HC-II), homodihydrocapsaicin-I (HDC-I), and homodihy-drocapsaicin-II (HDC-II).另一种采用250mm柱，流动性配比为31:59，此体系用于分离capsaicin (CAP) 和 nonivamide (NON)。结果他们表明，吹冰椒素含量在0.5 to 3600 ug时，此方法效果明显。
另外，Suk-Hyun-Choi等人[29]在相同仪器下对吹冰椒及制品中辛吹冰成份进行了分析。他们采用ODS-3V柱进行分析。通过体系的优化，根据时段对流动性配比改变，达到所要的分离目的。依次对各种吹冰椒素进行分析。
4 化学发光法在测定吹冰椒素含量的应用
李鑫[27]等人采用IFAS-A型流动注射光谱／光度分析仪(西安瑞科电子设备有限公司)进行化学发光测定；所用管路均为聚四氟乙烯管(1 mm)。实验采取4条管路，分别是：NaOH、鲁米诺、载液和样品与高碘酸钾混合液。蠕动泵以2．0 mL／min流速输送溶液。发生化学发光后，用光电倍增管检测(HV=-700V)，用记录仪记录化学发光强度值 。同法做一空白值。结果发现，化学发光强度值与吹冰椒素浓度的对数值呈良好的线性关系。线性范围为10.0～700 ug／L。
5 银离子色谱柱的应用和条件选择
The AOCS（美国油类化学家学会） Lipid Library网站[36]，银离子与双键结合的原理：银离子色谱法是基于独特的不饱和有机化合物属性的，也就是与过渡金属络合的能力，不饱和化合物充当电子供体，银离子作电子受体。普遍的络合模型是，在烯烃双键被占领的2p轨道和银离子游离的5s，5p轨道之间形成一个s型键，在被占领的银离子4d轨道和烯键游离的反键2p轨道，银离子可形成银离子可以形成烯键分子络合物。
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