快速测定水解酶活性的新方法研究(9)
3.2.6 精密度
在最佳显色条件下，配100mmol/L底物酸的磷酸缓冲溶液10mL，用0.1mol/L磷酸盐溶解。稀释至30，50，100mmol/L用双蒸水。
体系1：50mmol/L 转化液1mL和30mmol/L标酸1mL
体系2：50mmol/L 转化液1mL和0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL
体系1：50mmol/L 转化液1mL和50mmol/L标酸1mL
体系2：50mmol/L转化液1mL和0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL
体系1：50mmol/L转化液1mL和100mmol/L标酸1mL
体系2：50mmol/L 转化液1mL和0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液1mL
同样处理都稀释25倍
空白1：不加酸的水溶液
空白2：不加腈的转化液
取1mL上述混均液于体系中，依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL，0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中，充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min，15min后取出全部离心管，冷却至室温（室温放置约10min），最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL，混匀，在室温下反应10min，于500nm波长处测定吸光度值。6个样品同样操作。
3.2.7 腈水解酶活性的测定
空白1：不加酸的水溶液
在最佳显色条件下，取不加酸水溶液的稀释液1mL，依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL，0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中，充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min，15min后取出全部离心管，冷却至室温（室温放置约10min），最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL，混匀，在室温下反应10min，于500nm波长处测定吸光度值。
空白2：不加腈的转化液
在最佳显色条件下，取转化液的稀释液1mL，依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL，0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中，充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min，15min后取出全部离心管，冷却至室温（室温放置约10min），最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL，混匀，在室温下反应10min，于500nm波长处测定吸光度值。
样品：取50mmol/L,100mmol/L的加腈转化液100μL，加2900μL的双蒸水（稀释30倍）。
在最佳显色条件下，取转化液的稀释液1mL，依次加入4mmol/L盐酸羟胺的乙醇溶液 3mL，0.2mol/L DCC的乙醇溶液200μL于体系中，充分混匀后在60℃水浴锅内水浴15min，15min后取出全部离心管，冷却至室温（室温放置约10min），最后分别向离心管中加入0.5mol/L氯化铁的乙醇溶液50μL，混匀，在室温下反应10min，于500nm波长处测定吸光度值。
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