定量核磁共振波谱分析中药复方药物(7)
2.2 复方中药中黄芩苷类似物的核磁共振定量测定
2.2.1 复方中药中黄芩苷类似物定量测定方法
精密称取20mg左右复方中药样品，1.2mg左右邻苯二甲酸氢钾作为内标，加入氘代DMSO 0.5ml，振荡，摇匀，超声，离心，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
对得到的核磁共振氢谱中选定的内标峰和黄芩苷的定量峰进行积分，根据积分结果和称量结果，利用2010版中国药典的核磁共振绝对定量法[23]，计算复方中药中黄芩苷的含量，并且由于黄芩苷类似物中除了黄芩苷，其他成分含量十分少，故以黄芩苷的含量代替黄芩苷类似物在待测药物中的含量[30]。
2.2.2 复方中药中黄芩苷核磁共振定量内标物的选择
根据谱图库，参考谱图对比的方法，选择了2个内标物质，包括对苯二甲醛、邻苯二甲酸氢钾来进行实验，对比出峰位置对实验的定量有无干扰，并判断适合的内标物质。
对苯二甲醛和一清胶囊称取适量，放入同一核磁管内，加入氘代DMSO，超声溶解，离心后取上清液进行核磁测定，并把测定后的谱图与对苯二甲醛和一清胶囊的核磁氢谱标准谱图放在一起分别比较，判断对苯二甲醛是否适合作复方中药的内标进行定量测定。
称取适量一清胶囊和邻苯二甲酸氢钾，放入核磁管内，加入氘代DMSO，用同样的方法进行测定，并把测定后的谱图与一清胶囊和邻苯二甲酸氢钾核磁氢谱的标准谱图放在一起分别比较，判断邻苯二甲酸氢钾是否适合作复方中药的内标进行定量测定。最终选取邻苯二甲酸氢钾作为本实验的内标物。
2.2.3 实验条件对黄芩苷定量峰的影响
样品：样品1，氘代DMSO作为溶剂，邻苯二甲酸氢钾作为内标。
精密称取样品1质量为20mg左右，内标(邻苯二甲酸氢钾)质量为 1.2 mg左右。放于同一塑料管中，加入氘代DMSO 0.5mL，振荡，摇匀，超声10 min，离心，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
采样次数（NS）对积分的影响：设定D1为1.0s，P1为3.0μs，其他参数为默认值，分别设定采样次数为8、16、64、128、256次，对不同化学位移处峰面积进行积分，判断采样次数对积分面积和信噪比的影响。
延迟时间（D1）对积分的影响：设定NS为64次，P1为3.0μs，其他参数为默认值，分别设定延迟时间为0.1、0.5、1.0、2.0、4.0s，对不同化学位移处峰面积进行积分，判断延迟时间对积分面积和信噪比的影响。
脉冲宽度（P1）对积分的影响：设定NS为64次，D1为1.0s，其他参数为默认值，分别设定脉冲宽度为0.5、1.0、2.0、3.0、8.0、16.0μs, 对不同化学位移处峰面积进行积分，判断延迟时间对积分面积和信噪比的影响。
根据以上实验结果选择复方中药黄芩苷组分的最佳实验条件。
2.2.4 测试溶液的稳定性
样品：样品1，氘代DMSO作为溶剂，邻苯二甲酸氢钾作为内标。
精密称取样品1质量为20mg左右，内标(邻苯二甲酸氢钾)质量为 1.5 mg左右。放于同一塑料管中，加入氘代DMSO 0.5mL，振荡，摇匀，超声10 min，离心，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
核磁共振仪参数设置为复方中药中黄芩苷组分的最佳测定条件。在一定的时间间隔下，进行核磁实验，根据内标峰面积与复方中药中黄芩苷成分的积分面积比值，判断测试溶液的稳定性。
2.2.5 其他组分的干扰
2.2.5.1 其他中药成分
由于中药不同于西药，其成分的化学物质组成并不单一。如本次实验样品中含大黄，其主要成分为大黄酸，但还有其他成分，这些成分可能会对测定产生一定的干扰，故需检测有无这类干扰。
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