定量核磁共振波谱分析中药复方药物(8)
按2010版药典中一清胶囊制备方法中各中药的浸膏的制备方法[21]，从大黄、黄芩和黄连中分别提取浸膏。首先分别称取黄连0.66 g、大黄2.0g、黄芩1.0g，分别置于三个小烧杯中，加入25ml水，在105℃下微沸2h，收集剩余液体；再加入25ml水，在105℃下微沸1.5h，将剩余液体与之前液体混合，将此液在105℃下微沸，直至出现浸膏。并以氘代DMSO作溶剂，分别配成溶液进行核磁实验，探究除黄芩外其他中药成分是否会对黄芩苷的定量测定有影响。
2.2.5.2 辅料
药品中所含的一些辅料成分也可能对实验所测的质子峰和核磁共振光谱的信噪比产生影响，故需检测有无这类干扰。
将一定量的硬脂酸镁、钙盐（二水合硫酸钙）和可溶性淀粉分别加入塑料管内，加入氘代DMSO 0.4mL，振荡，摇匀，超声10 min，离心，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。同时，作溶剂的空白对照试验，通过对比，探究这些辅料成分是否会对黄芩苷的定量测定有影响。
2.2.6 供试品的制备
取一清胶囊一粒，取出胶囊内药粉，精密称取20mg左右药粉，1.2mg左右邻苯二甲酸氢钾作为内标，放于同一塑料管中，加入氘代DMSO 0.5ml，振荡，摇匀，超声10 min，10000r/min条件下离心10min，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
取三黄片一粒，刮去糖衣，称量，将药片置干燥洁净研钵中，研磨，精密称取20mg左右药片粉末，1.2mg左右邻苯二甲酸氢钾作为内标，放于同一塑料管中，加入氘代DMSO 0.5ml，振荡，摇匀，超声10 min，10000r/min条件下离心10min，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
2.2.7 仪器调节
按照上述测定条件调整仪器。将样品放人核磁共振谱仪中，先锁场，然后匀场，测定后，调整相位并进行基线校正，选定内标峰和定量峰，并进行积分。
2.2.8 对复方中药实际样品中黄芩苷组分回收率测定
精确称取20 mg左右一清胶囊药粉，1.5mg左右邻苯二甲酸氢钾作为内标置于同一塑料管中，加入氘代DMSO振荡，摇匀，超声10 min，离心，取上清液，然后将上述溶液转移至核磁管中进行分析。再向核磁管中加入精确称取的0.5mg左右黄芩苷标准品后进行分析。再重复4次加黄芩苷标准品并进行分析。
核磁共振仪参数设置为复方中药一清胶囊的最佳测定条件。
2.2.9 黄芩苷标准曲线的绘制
精确称取1.0mg，1.5mg，2.0mg，2.5mg，3.0mg左右黄芩苷基准物质，1.0mg左右邻苯二甲酸氢钾基准物质作为内标，分别放于不同的塑料管中，各加入氘代DMSO 0.5mL，振荡，摇匀，超声10min。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
核磁共振仪参数设置为黄芩苷最佳测定条件。从电脑上积分得到内标峰面积与黄芩苷定量峰的峰面积比值，以此比值为Y轴数据，加入内标质量与加入黄芩苷标准品质量的比值为X轴数据，并线性拟合出标准曲线。
通过相关系数考察线性，并对照理论算法得出的斜率，判断标准曲线的准确性和利用核磁共振绝对定量法对复方中药中特定组分定量的可靠性。
2.2.10 对复方中药实际样品中黄芩苷组分的测定
三种三黄片药片各取1片，刮去糖衣，精密称量，研细，精确称取20 mg左右三黄片药片粉末，1.2 mg左右邻苯二甲酸氢钾作为内标，放于同一塑料管中，加入氘代DMSO 0.5mL，振荡，摇匀，超声10 min，离心，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
三种一清胶囊各取一粒，取出药粉，精确称取20 mg左右一清胶囊粉末，1.2mg左右邻苯二甲酸氢钾作为内标，放于同一塑料管中，加入氘代DMSO 0.5mL，振荡，摇匀，超声10 min，离心，取上清液。然后把上述溶液转移至核磁管中进行分析。
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