双鼠李糖脂对癌细胞的抑制作用的研究(7)
b).用排枪吸走旧培养液后，加入不同浓度的双鼠李糖脂，分别为10、100、120、140、160、180、200μg•mL-1，依据实验需要在37℃，5% CO2培养箱中培养48h，以无细胞的培养液为对照组；
（5）MTT检测：每孔加入20μL MTT，（5mg•mL-1，即0.5% MTT）培养4h，结束培养后用排枪小心吸走培养液，每孔加150μL DMSO，摇床低速振荡10min使结晶物溶解，再用酶标仪在波长490nm处测各孔的吸光值，记录结果
2.2.4 MIC实验
MIC实验采用的是微孔板法
1 配制LB培养基，并接种6种供试菌，37℃摇床培养1d，作为种子液；
2 取5ml菌悬液，稀释10倍，供下步使用；
3 无菌水配制浓度为5000、3000、1000、500、400、300、200、100、50µg/ml的单、双鼠李糖脂溶液；
4 往灭过菌的96孔板中依次加入20µl上述药物，无菌操作，再各加入180µl 菌液，混匀后，设置阴性对照和空白对照，放入摇床继续培养12h；
5 用酶标仪测定其600nm的OD值。
3 结果和讨论
3.1 MTT结果讨论
3.1.1 单鼠李糖脂
图3 单鼠李糖脂抗肿瘤活性
由图3知，单鼠李糖脂浓度为100µg/ml-150µg/ml时，随着浓度的升高，A549、H460、HepG2的存活率降低，但对MCF-7细胞无明显抑制作用。相同浓度的单鼠李糖脂对细胞H460的抑制效果最明显。
3.1.2 双鼠李糖脂
图5 双鼠李糖脂抗肿瘤活性
由图5知，双鼠李糖脂浓度在100µg/ml-200µg/ml时，随着双鼠李糖脂浓度的升高，细胞的存活率降低，且在浓度超过200µg/ml时，细胞基本不生长。
3.2 IC50浓度值
根据各组分浓度与细胞存活率的关系，可通过IC50计算软件计算出各组分物质对各种细胞的IC50 浓度。见表3
表3 各物质对肿瘤细胞的IC50浓度值（µg/ml）
A549 HepG2 H460 MCF-7
单鼠李糖脂 143.14 99.43 112.99 /
双鼠李糖脂 175.90 143.21 150.68 125.15
注：/ 代表IC50大于200µg/ml
根据表3我们可知，在对比单鼠李糖脂和双鼠李糖脂的IC50时，单鼠李糖脂的值比双鼠李糖脂的值要小，说明在较小浓度下就可以抑制一半肿瘤细胞，单鼠李糖脂较双鼠李糖脂效力高。但是双鼠李糖脂对表中的四种肿瘤细胞均有IC50值，这比单鼠李糖脂的范围更广。结果跟我们预测的双鼠李糖脂可能较小的结论不太一致。这可能是我们提取的双鼠李糖脂不是太纯导致，所以下一步要提取更纯的双鼠李糖脂。
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