四环素对蓝藻藻毒素含量影响的定性研究(10)
线性范围：0—4ppb
是集合的变异系数板内小于10%，板间小于15%
3.3.4 注意事项
1）标准系列应置于同一板条。
2）室温低于20°C或试剂及样本没有回到室温（20—25°C）会导致所有标准的OD值偏低。
3）在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，怎会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步。
4）加每种试剂前需要将其摇匀。
5）反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤，
6）不要使用过了有效日期的试剂盒，也不要使用过了有效日期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要使用不同批号试剂盒中的试剂。
7）储存条件：保存试剂盒于2—8°C，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。配制好的抗体溶液与酶标二抗溶液如需下次使用，应在加入板条后立即置于冰箱冷藏，而不能等到实验完全结束后再放入冰箱。
8）试剂变质的迹象：发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5(A450nm<0.5)时，表示试剂可能变质。
9）在加入底物液和显色液后，一般显色20—30分钟即可。若颜色较浅，可延长反应时间到35分钟，但不得超过40分钟。反之，则减短反应时间。
10）虽MC—LR标准浓度很低，但是严格规范的实验操作不可忽视，凡接触到标样的器皿都要灭菌。
11）试剂盒最佳反应温度为37°C，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
第四章 结果与讨论
4.1 细胞个数与吸光度之间的线性关系
通过显微镜计数并在680m处测定吸光度，建立不同藻细胞浓度下的藻细胞数量与光密度之间的线性关系，具有良好的相关度，蓝藻细胞个数y=238.67x-2.0454，R2=0.9992，见图一。
表4.1 胞个数与吸光度
编号 吸光度 藻个数（105）
0 0 0
1 0.042 9.5
2 0.109 26.5
3 0.228 53.5
4 0.456 97.5
5 1.065 155.5
6 1.766 421.5
图4.1 细胞个数与吸光度的线性关系
4.2 样品中细胞外藻毒素含量
将完成接种的藻液分成五组，每组中含有三个平行样。向1至5组中分别加入浓度为：0ppm、1ppm、2ppm、5ppm、10ppm的四环素。放入培养箱中培养48小时后，使用微囊藻毒素酶联免疫快速检测试剂盒测定每组样品中的藻毒素含量。根据标准曲线计算出每组样品中藻毒素含量的平均值，如图4.2.1所示。
图4.2. 样品中细胞外MC—LR浓度图
由图可以看出，1组试样中不含四环素为空白样，其中的藻毒素含量最大为14073.28ng/L。2组中含有浓度为1ppm的四环素，其中的藻毒素含量为9231.021ng/L，较1组中的有明显的下降其下降率为34.41%。3组和4组中含有浓度分别为2ppm和5ppm的四环素，随着四环素浓度的增大，藻毒素含量也逐渐降低分别为7459.835ng/L、6697.78ng/L较1组的下降率分别为47.00%、52.41%。5组中含有浓度为10ppm的四环素，但其中的藻毒素含量要比3组、4组中的大为8744.681ng/L，较1组的下降率为37.86%。整个趋势是随着四环素含量的增大，蓝藻释放的藻毒素先下降后上升的趋势。
4.3 单细胞中细胞外藻毒素含量
4.3.1 细胞个数
藻液染毒0小时后，在放入培养箱之前，测定每组样品在680nm处的吸光度。由上述细胞个数和吸光度的线性关系，计算出每个样品中蓝藻的细胞个数，并将平行样中的细胞个数取平均值。藻液染毒48小时后，在测定藻毒素含量之前，测定每组样品在680nm处的吸光度。由上述细胞个数和吸光度的线性关系，计算出每个样品中蓝藻的细胞个数，并将平行样中的细胞个数取平均值，将两者进行比较，如图4.3.1所示。
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