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四环素对蓝藻藻毒素含量影响的定性研究(8)
2.2.3 仪器与试剂
(1)仪器设备
玻璃仪器:烧杯(800ml、350ml、100ml)、量筒50ml、锥形瓶(500ml、250ml、100ml、50ml)、石英比色皿、注射器、有塞锥形瓶(25ml)
塑料仪器:枪头、滤头、注射器
表2.1 设备表
名称 厂家 型号
电子
天平 上海海康电子仪器厂 FA1004
光照培养箱 上海博泰实验设备有限公司 SPX—GB—150
紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 TU—1810
电热鼓风干燥箱 上海恒一科学仪器有限公司
恒温水浴锅 北京莱伯泰科仪器有限公司 HB—03
超声仪 上海宁商超声仪器有限公司 SY—360
冰箱 安徽康佳电器有限公司 BCD—1083
立式压力蒸汽灭菌器 上海博迅实业有限公司
移液枪 Dragon Laboratory Instruments Limited DM10121548
酶标仪
超声波细胞破碎仪 宁波新芝生物科技股份有限公司 JY96—IIN
(2)试剂
表2.2 试剂
名称 厂家 备注
MC—LR试剂盒 上海生工生物股份有限公司
铜绿微囊藻 武汉中科院水生生物研究所 FACHB—905
四环素 Dr Ehrenstorfer Gmbh 含量:98.0%
纯净水 杭州娃哈哈集团有限公司
乙醇 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.7%
NaNO3 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.0%
K2HPO4 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.0%
MgSO4•7H2O 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.0%
CaCl2•2H2O 上海展云化工有限公司 AR,含量:97—104%
Citric acid(柠檬酸) 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.5%
Ferric ammonium citrate
(柠檬酸铵盐) 上海展云化工有限公司 CP,含量≥:20.5—22.5%
EDTA Na2 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.0%
Na2CO3 上海展云化工有限公司 AR,含量≥99.0%
A5(Trace mental solution) 已配制
第三章 实验部分
3.1间接酶联免疫法测定藻毒素含量
酶联免疫吸附剂测定法,简称酶联免疫法,或者ELISA法。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。
3.3.1 检测原理
微囊藻毒素酶联免疫检测试剂盒由可以和微囊藻毒素结合的特异抗体及微囊藻毒素酶标记物多克隆抗体制成。样品中的微囊藻毒素作为抗原与特异抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。利用酶标记的抗体以检测已与固相结合的受检抗体。检测过程中,先加入微囊藻毒素的样品到测试孔中接着加入特异抗体,用洗涤液洗涤除去未结合的抗原及杂质。然后加入酶标抗体与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶的量代表了特异性抗体的量。接着加底物显色,颜色深度代表标本中受检抗体的量,从而检测出微囊藻毒素的量。
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