金霉素对蓝藻的急性毒性研究(6)
2 研究方案与方法
2.1 研究目标和内容
抗生素在水体中广泛存在，蓝藻在富营养化水体中是优势物种[20]，因此两者的共存可能性很大。然而，目前有关此类的环境风险研究很少。所以我们要研究此课题。一是为抗生素的合理使用提供参考，二是为蓝藻水华爆发提供一个知识积累。
2.2 实验铜绿微囊藻的培养
实验所用藻类种源通过购买获得，藻的培养过程有容器、工具的消毒，培养液的制备，接种和培养四个步骤。
所用到的实验材料有：FACHB-905铜绿微囊藻株（中国科学院水生生物研究所，武汉，中国）、容量瓶、注射器、量筒、烧杯、电子天平（FA1004，海康电子仪器厂，上海）、移液枪（20~200µm，DU008，DragonLab）、移液枪（200~1000µL，DX89019，DragonLab）、紫外－可见光分光光度仪（TU-1810，普析通用仪器有限责任公司，北京）、光照培养箱（SPX-GB-150，博泰实验设备有限公司，中国）、立式压力蒸汽锅（博讯实业有限公司，上海）、超声波仪（SY-360，宁商超声仪器有限公司，上海）、电热鼓风干燥箱（恒一科学仪器有限公司，上海）、超声波细胞粉碎机（新芝生物科技股份有限公司，JY 96-IIN，宁波）
实验所用试剂有金霉素（Dr.Ehrenstorfer，Germany），实验药品（分析纯，展云化工有限公司，上海）：NaNO3、K2HPO4 MgSO4•7H2O、CaCl2•2H2O、Citric acid(柠檬酸)、Ferric ammonium cirrate(柠檬酸铵盐)、EDTA Na2、Na2CO3、A5 (Trace mental solution)：H3BO3、MnCl2•4H2O、ZnSO4•7H2O、Na2MO4•7H2O、Co(NO3) 2•7H2O、CuSO4•5H2O ；○4无水乙醇（分析纯，展云化工有限公司，上海）；○5 纯净水（哇哈哈集团，杭州，中国）
(1) 容器、工具的消毒
采用高温高压灭菌锅消毒灭菌，加热消毒法该法是利用高温高压杀死微生物的方法，防止仪器上的微生物和菌类物质影响铜绿微囊藻生长导致实验结果无效。不能耐高温的容器和工具如塑料和橡胶制品等不能用加热法消毒。
(2) 培养液的制备
藻的培养液（液体培养基）是在纯水中加入各种营养物质配制而成。本实验以铜绿微囊藻为研究对象，故培养基为BG11培养基，培养基成分（配1000 mL）如下：
表1 BG11培养基成分表
BG11 培养基成分表
NaNO3 1.50 g/L
K2HPO4 0.04 g/L
MgSO4•7H2O 0.075 g/L
CoCl2•2H2O 0.036 g/L
Ferric ammonium citratic 0.006 g/L
EDTANa2 0.05 g/L
NaCO3 0.02 g/L
As ( Trace mental solution ) 1 mL/L
表2 As ( Trace mental solution ) 成分表
As ( Trace mental solution ) 成分表
H3BO3 2.86 g/L
MnCl3•4H2O 1.86 g/L
ZnSO4•7H2O 0.22 g/L
Na2MnO4•2H2O 0.39 g/L
Co(NO3)2•6H2O 0.05 g/L
CuSO4•5H2O 0.08 g/L
(3) 藻类接种
培养液配好后应立即进行接种培养。接种就是把选为藻种的藻液接入新配好的培养液中。
藻种的质量一般要求选取无敌害生物污染、生活力强、生长旺盛的藻种培养。藻液的外观应颜色正常、无大量沉淀和无明显附壁现象。
藻种的数量在三角烧瓶和细口玻璃瓶培养的藻种，接种的藻液容量和新配培养液量的比例为1:2~1:3。
接种的时间一般来说，接种的时间最好是在上午的8时~10时，不宜在晚上接种。上午接种可以吸取上浮的运动力强的藻细胞做藻种，弃去底部沉淀的藻细胞，起到择优的作用。
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